一、原料藥中亞硝基胺雜質控制的法規背景
2018年7月5日EMA發布的有關纈沙坦的公告和2018年12月11日FDA官方網站上有關華海藥業的警告信將華海藥業推到了風口浪尖。事件的主角是之前默默無聞的纈沙坦原料藥中的微量雜質N-亞硝基二胺（NDMA）。N-亞硝基二胺（NDMA）是一種基因毒性雜質，可以直接或間接損傷細胞DNA，能引起基因突變，甚至是可能促使腫瘤發生。世界衛生組織國際癌癥研究機構將N-亞硝基二胺（NDMA）列為2類致癌物質，其對人類致癌性證據有限，對實驗動物致癌性證據充分。隨著事件的發酵和科學的認知，人們發現不僅在纈沙坦、厄貝沙坦、氯沙坦等沙坦類抗高血壓藥物中有，還在抗胃酸藥雷尼替丁和尼扎替丁中也有，甚至在抗糖神藥二甲雙胍中也存在亞硝胺雜質。同時亞硝基雜質從最初檢測出的單一的N-亞硝基二胺（NDMA）發展到原料藥或藥品中已檢測出N-亞硝基二甲胺（NDEA）、N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）、N-亞硝基異丙基乙胺（NIPEA）和N-亞硝基甲基苯胺（NMPA）雜質以及理論上應該存在的N-亞硝基二異丙胺（NDPA）和N-亞硝二丁基胺（NDBA）等雜質。
EMA針對亞硝胺雜質連續發文，包括2020年6月23日沙坦類藥品中亞硝胺雜質事件教訓，2020年6月25日藥品中的亞硝胺雜質評估報告 EMEA/H/A-5(3) /1490，2020年8月3日 授權持有人/申請人就CHMP對第726/2004號條例關于人用藥品中亞硝胺雜質的第5(3)條的意見的提問和回答 EMA/409815(4) /2020等，文中重點說明了亞硝基雜質存在的根本原因，如何進行亞硝胺雜質進行評估，如何進行檢測確認，分析方法及限度要求，MAH應如何展開相應后續工作等等。原料藥生產企業申報CEP時需要在3.2.S.3.2雜質項下描述亞硝胺雜質情況，否則會收到缺陷信。注冊同行要知道延誤獲得CEP證書的時間，是直接或間接會增加企業的成本。筆者在2021年5月就收到了EDQM要求增補亞硝胺雜質信息的發補，其原文為“A suitable risk assessment in relation to the possible formation of nitrosamines should be included in 3.2.S.3.2. This should take into account the manufacturing process, including starting materials and raw materials used.”
2020年9月1日，FDA頒布《人用藥中亞硝胺雜質控制》指南，建議了API和藥品生產商應采取的步驟，以檢測和防止藥品中亞硝胺雜質含量不合格。同時美國藥典委員會USP發布了通則（1469）亞硝胺雜質征求意見稿，對樣品制備，限度推導、計算方法等進行了描述，并提供了四種參考定量方法。USP特別推薦亞硝胺雜質定量分析方法驗證應考慮線性范圍、準確度、重現性、中間精密度和定量限等指標及其可接受標準。FDA在指南中也明確了亞硝胺雜質評估的時間表：1.已上市或批準的原料藥或藥品，在指南發布后6個月內完成風險評估；評估發現有亞硝胺雜質的品種應盡快進行檢測并在3年內完成必要的注冊變更申報。2.已申報正在審評中的原料藥或藥品，盡快完成風險評估，檢測發現亞硝胺雜質高于可接受限度（AI）的應立即通知FDA；3.準備申報的原料藥或藥品，進行風險評估必要時檢測確認；若已完成除亞硝胺雜質評估外工作原計劃立即申報的，可先提交申請，在完成亞硝胺雜質評估和測試后以增補或變更內容提交。
2020年5月，國家藥監局藥審中心發布了《化學藥物中亞硝胺類雜質研究技術指導原則(試行)》。因此無論是基于內部質量管理體系要求，還是考慮外部產品申報注冊和回復客戶問卷調查需求，國內的原料藥生產企業應對產品進行亞硝基雜質的風險評估并據此制定控制策略。需要特別提醒的是，從今往后，原料藥生產企業甚至產品研發公司對基因毒性雜質包含亞硝胺雜質應在產品的研發源頭即開始考慮，此舉對產品生命周期全過程管理起著至關重要的作用。引用孫子兵法云：“謀定而后動，知止而有得”。企業的決策如同作戰用兵，必須做到三思而后行，從而實現“未戰而廟算勝”。
二、舉例進行原料藥中亞硝胺雜質的評估
1 風險識別
在公司內組建一個包含研發部、生產部、物控部、工程設備部、化驗室和質量保證部等部門人員的評估團隊展開以下工作。
研發部人員為主，根據FDA和ICH指南首先從理論上確定亞硝胺雜質化學結構為亞硝基與胺（R1N（-R2）-N=O），如下反應方程所示。它們通過胺（仲胺、叔胺或季胺類）和亞硝酸（酸性條件下的亞硝酸鹽）之間的亞硝化反應形成。
接下來以研發為主的評估團隊結合本公司實際情況從理論上梳理了亞硝胺雜質可能存在的根本原因和需要排查的情況見下表.凡是對于排查結果為有的，應進一步重點分析評估，必要時應采取措施降低亞硝胺雜質的存在限度。
評估團隊逐一對原料藥A的以上八種情況進行了討論和評估，沒有發現任何一個符合上述產生亞硝胺雜質根本原因的情況。但一致認為應按照指南從各個可能的源頭和具體細節進行進一步的討論。
亞硝胺雜質可能從多個來源進入原料藥A，評估團隊從下面魚骨圖中各個影響因素來討論亞硝胺雜質的情況。
1.1 生產設備
原料藥A生產過程中用到的設備清單表
原料藥A生產過程中所用的設備均為專用設備，這些設備含輔助用品，如濾袋、濾紙、墊圈、閥門等材質均不含亞硝基化合物，胺基和亞硝基。同時，儲存和轉移用到的儲罐、管道、桶等均為不銹鋼或聚丙烯材質，也不含亞硝基化合物、胺基和亞硝基結構。因此，原料藥A生產設備帶來亞硝胺雜質污染的風險極低。
1.2 包裝系統
原料藥A直接接觸的內包裝為低密度聚乙烯，該供應商是經現場審計批準和具有藥用塑料袋國家注冊證的合格供應商。根據原料藥A的性質，產品在室溫條件保存理論上不會與低密度聚乙烯產生相互作用，更不會產生亞硝胺雜質。包裝過程在潔凈區18-26℃進行，不涉及熱熔或吹泡，而是采用雙層藥用塑料袋包裝每層塑料扎帶扎緊，也不會產生亞硝胺雜質。因此原料藥A包裝系統帶來的亞硝胺雜質污染風險也極低。
1.3 原輔料
原料藥A生產過程中用到的原輔料清
從上表中各物料的結構式或分子式可知，原料藥A的物料中沒有用到亞硝酸鈉和其它任何亞硝酸化合物，但用到了仲胺和叔胺化合物以及強酸鹽酸。評估團隊對以上物料逐一進行了風險分析。
起始原料
原料藥A的起始物料。它的制備過程為：以XXXX為原料，以甲醇為溶劑和丙酮氰醇、碳酸鉀發生氰化反應，用鹽酸中和水解得到氰化物；氰基物再與乙二醇和原甲酸三乙酯以及對甲苯磺酸進行縮酮反應，加三乙胺水析得到縮酮物；第三步先用鎂、一氯甲烷、四氫呋喃制備格氏試劑，然后縮酮物以甲苯做溶劑與慢慢滴加的格氏試劑反應，最后用鹽酸中和得到格氏物；格氏物在甲醇中用鹽酸水解，再用碳酸鈉中和水析得到粗品；粗品在二氯甲烷和乙醇中用活性炭脫色，固液分離最后用甲醇溶解，降溫析晶得到起始原料成品。整個工藝過程未用到亞硝酸鈉或其它亞硝基類化合物，僅在縮酮反應后用到三乙胺進行中和，反應體系不是強酸性且不存在亞硝基化合物，因此不會形成亞硝胺雜質。經現場審計確認：起始原料供應商有完善的質量保證體系，且采用專用生產線組織生產，不使用回收溶劑或物料也沒有委托第三方進行回收，溶劑采用專用槽車運輸且生產過程不使用塑料或鐵桶轉運而直接用管道傳輸到生產車間，生產過程遵守詳細的操作規程等等。結合對供應商的現場審計情況及其生產、儲存和運輸等管理措施，原料藥A起始物料中雖然使用了EMA提到的溶劑甲苯（有報道稱可能還有伯胺或仲胺雜質）和試劑三乙胺，但總體上亞硝胺雜質存在的風險較低。
醋酐
醋酐生產采用乙酸在高溫、負壓條件下，以磷酸三乙酯作催化劑，其乙酸蒸汽在裂化管內裂解生成乙烯酮和水。經冷凝并冷卻分離后，乙烯酮用乙酸吸收，生成粗醋酐；粗醋酐經精餾提純制得醋酐。制備醋酐的工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。結合對供應商的問卷調查情況及其生產、儲存和運輸等管理措施，其亞硝胺雜質污染風險極低。
起始原料
冰醋酸以乙醛為原料，醋酸錳為催化劑，氧化生成醋酸。冰醋酸制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。結合對供應商的問卷調查情況及其生產、儲存和運輸等管理措施，其亞硝胺雜質污染風險極低。
四氫呋喃
1.4-丁二醇在酸性（硫酸）條件下脫水制得四氫呋喃粗品，粗品經精餾得到四氫呋喃。四氫呋喃制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。同時本公司四氫呋喃供應商采用專用桶包裝和運輸。結合對供應商的調查問卷情況及其生產、儲存和運輸等管理措施，其亞硝胺雜質污染風險極低。
原甲酸三乙酯
原甲酸三乙酯以乙醇、氫氧化鈉和氯仿為原料。先以乙醇和氫氧化物制得乙醇鈉溶液，再于氯仿進行縮合反應，除去固體氯化鈉后，精餾得到原甲酸三乙酯。原甲酸三乙酯制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。同時本公司原甲酸三乙酯供應商采用專用桶包裝和運輸。結合對供應商的現場審計情況及其生產、儲存和運輸等管理措施，其亞硝胺雜質污染風險極低。
無水乙醇
乙醇采用分子篩吸附法制得。無水乙醇制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。同時本公司乙醇供應商采用專用槽車運輸。結合對供應商的問卷調查情況及其生產、儲存和運輸等管理措施，其亞硝胺雜質污染風險極低。
N-甲基苯胺
N-甲基苯胺采用苯胺和甲醇在銅鋅鉻催化劑作用下進行烷基化反應得到N-甲基苯胺，再經過精餾制得高純度的N-甲基苯胺。N-甲基苯胺為仲胺結構，在酸性條件下若與亞硝酸反應會產生N-甲基苯基亞硝胺雜質（NMPA）。結合對供應商的現場審計情況及其生產、儲存和運輸等管理措施，N-甲基苯胺的生產過程沒有用到任何亞硝基化合物，理論上其亞硝胺雜質污染風險低。但考慮其本身為仲胺，需要進一步考慮原料藥A制備過程中N-甲基苯胺使用步驟是否在強酸條件下與亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物有接觸，故N-甲基苯胺的使用存在一定亞硝基雜質污染的風險。
甲醛
甲醛采用甲醇在銀催化下空氣氧化法制得。甲醛制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。同時本公司甲醛供應商采用專用桶儲存和運輸。結合對供應商的問卷調查情況及其生產、儲存和運輸等管理措施，其亞硝胺雜質污染風險極低。
鹽酸
鹽酸主要由氫氣和氯氣反應制得氯化氫氣體，冷卻后用水吸收成為鹽酸。鹽酸制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。同時本公司鹽酸供應商采用專用設備生產和儲存，也用專用桶儲存和運輸。結合對供應商的問卷調查情況及其生產、儲存和運輸等措施，其亞硝胺雜質污染風險極低。但鹽酸作為強酸可作為亞硝酸生成的因素之一，需要特別考慮其被使用的步驟是否有亞硝胺化合物和胺類化合物存在，最終導致亞硝胺雜質產生的可能性。
N,N-二甲基甲酰胺
N,N-二甲基甲酰胺以甲醇為溶劑，甲醇鈉為催化劑，將原料一氧化碳在高壓下與二甲胺反應，經過分離得到N,N-二甲基甲酰胺。N,N-二甲基甲酰胺為叔胺結構，在酸性條件下若與亞硝酸反應會產生N，N-二甲基亞硝胺雜質（NDMA）.結合對供應商的問卷調查情況及其生產、儲存和運輸等管理措施，N,N-二甲基甲酰胺自身制備過程沒有用到亞硝基化合物，故形成亞硝胺雜質可能性低。但考慮它本身為胺類，需要進一步考慮原料藥A制備過程中N,N-二甲基甲酰胺使用步驟是否在強酸條件下與亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物有接觸，故N,N-二甲基甲酰胺的使用，存在產生亞硝胺雜質的風險。
鈀炭
鈀炭合成過程為活性炭加入飲用水中攪拌，以氯化鈀溶液滴加到活性炭水溶液中進行碳吸附，滴加完成后通氫氣進行還原，還原反應完畢后加氫氧化鈉水溶液中和，離心，水洗得到鈀炭。鈀碳制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物，同時本公司鈀炭供應商采用專用設備生產。結合對供應商的問卷調查情況及其生產、儲存和運輸等措施，其亞硝胺雜質污染風險極低。
化合物B
化合物B以XXXX為原料，加硫酸進行脫水得到XXXX粗品，粗品經過精餾得到化合物B。化合物B制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。同時本公司化合物B供應商采用專用設備生產和儲存，也用專用桶儲存和運輸。結合對供應商的問卷調查情況及其生產、儲存和運輸等管理措施，其亞硝胺雜質污染風險極低。
甲醇
甲醇以一氧化碳與氫氣為原料在加壓和高溫下采用酮基催化劑合成甲醇。甲醇制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。同時本公司甲醇供應商采用專用儲罐儲存，也用專用桶運輸。結合對供應商的現場審計情況及其生產、儲存和運輸等管理措施，其亞硝胺雜質污染風險極低。
二氯甲烷
二氯甲烷以氯甲烷和液氯為原料，氯化鈣為催化劑制得二氯甲烷。二氯甲烷制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。同時本公司二氯甲烷供應商采用專用設備生產和儲存，也用專用桶儲存和運輸。結合對供應商現場審計情況及其生產、儲存和運輸等管理措施，其亞硝胺雜質污染風險極低。
活性炭
活性炭以木屑為原料，干燥后與氯化鋅溶液混合攪拌，然后進行碳化，碳化完成后萃取氯化鋅。再用鹽酸水溶液除去碳中的鋅離子，用飲用水沖洗鹽酸，最后干燥得到活性炭。活性炭制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。結合對供應商的問卷調查情況及其生產、儲存和運輸等措施，其亞硝胺雜質污染風險極低。
對甲苯磺酸
對甲苯磺酸以三氧化硫作為磺化劑，加入少量醋酸作為定位劑，磺化甲苯制備得到對甲苯磺酸。對甲苯磺酸制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。結合對供應商的問卷調查情況及其生產、儲存和運輸等措施，其亞硝胺雜質污染風險極低。
吡啶
吡啶以β-酮酸酯，乙醛及氨做原料，經多分子環化成吡啶。吡啶及其衍生物比苯穩定，其反應性與硝基苯類似。典型的芳香族親電取代反應發生在3、5位上，但反應性比苯低，一般不易發生硝化、鹵化、磺化等反應。結合對供應商的問卷調查情況及其生產、儲存和運輸等管理，其形成亞硝胺雜質可能性低。但也應考慮其使用過程中是否在強酸條件下與亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物接觸，吡啶的使用存在亞硝胺雜質污染的一定風險。
碳酸氫鈉
碳酸氫鈉主要采用純堿碳化法合成。碳酸氫鈉制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。結合對供應商的問卷調查情況及其生產、儲存和運輸等措施，其亞硝胺雜質污染風險極低。
飲用水
本公司原料藥A合成過程中用到較大配比的飲用水。生產過程用到的飲用水由XXXX市自來水公司管網供應，自來水公司采用 “混凝—沉淀—過濾—消毒”流程對原水處理，過程中加入了二氧化氯，硫酸鋁，沒有使用亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物處理，同時也沒有加入任何胺類化合物。但因亞硝基化合物廣泛存在于植物中，原水不可避免的含有一定量的亞硝基化合物。本公司每年委托有資質的單位按照國標進行飲用水的全檢，2020年飲用水檢測結果中顯示亞硝基濃度為0.003mg/L，因此需要考慮在原料藥A制備中飲用水的使用步驟是否在強酸條件下能與胺類化合物接觸發生反應形成亞硝胺雜質。因此飲用水的使用存在一定的亞硝胺雜質污染風險。
綜上所述，原料藥A原輔料中的N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基苯胺、吡啶和飲用水存在引入亞硝胺雜質污染的風險，需要從工藝的角度進一步討論其可能性。
1.4 從工藝流程方面進行評估
原料藥A工藝流程圖
1.4.1 各工序是否能產生亞硝胺雜質的討論
中間體1制備工序
以起始原料為原料，冰醋酸和醋酐為反應溶劑，對甲苯磺酸作催化劑，發生?；磻?。反應完成后，加乙醇與過量的醋酐反應生成乙酸乙酯，終止反應。再加鹽酸水解副產物單酯雙酯物，水解反應完成后加碳酸氫鈉中和至中性，離心。固體物水洗干燥得到中間體1。
根據亞硝胺雜質生成的原理：亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物，胺類化合物在強酸下條件形成。本步反應中沒有使用任何亞硝基化合物和胺類化合物，即使在鹽酸強酸性條件下不會有亞硝胺雜質形成。假設起始原料中殘留微量的三乙胺與飲用水中極微量的亞硝基在本步強酸條件下生成N-二乙胺亞硝基雜質（NDEA），也是極低量的存在，可考慮對成品進行測試進一步證實。
中間體2制備工序
以中間體1為原料，四氫呋喃和無水乙醇為溶劑，原甲酸三乙酯做反應試劑，對甲苯磺酸為催化劑進行醚化反應。醚化反應完成后加入N-甲基苯胺及甲醛進行麥尼烯反應，N-甲基苯胺和甲醛縮合形成麥尼烯堿，形成6位中間體2。反應完成后滴加鹽酸水解，離心水洗干燥得到中間體2。麥尼烯堿在鹽酸作用下形成麥尼烯鹽，通過離心水洗去除。
根據亞硝胺雜質生成的原理：亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物，胺類化合物在強酸下條件形成。本步反應中沒有使用任何亞硝基化合物，僅用到了N-甲基苯胺。即使使用鹽酸具備強酸性條件，因缺少亞硝基化合物也不會有亞硝胺雜質形成。假設本步反應中N-甲基苯胺與飲用水中極微量的亞硝基在本步強酸條件下生成N-甲基苯基亞硝基雜質（NMPA），也是極低量的存在，可考慮對成品進行測試進一步證實。N-甲基苯胺以鹽的方式溶解于大量的水離心除去，同時后續在離心機中一小時的沖水可進一步將之除去。經對成品采用驗證后的方法測試，連續5批原料藥A中含N-甲基苯胺量低于1ppm，可證實其基本被完全消除。
中間體3工序
以中間體2為原料，二甲基甲酰胺為溶劑，化合物B做反應試劑，鈀炭做催化劑進行反應，將6位中間體2催化加氫反應生成6位的甲基。氫化反應完成后過濾鈀炭，滴加入鹽酸將副產物6β-原料藥A進行轉位生成原料藥A。轉位完成后加入碳酸氫鈉溶液中和鹽酸，離心水洗干燥得到中間體3。
根據亞硝胺雜質生成的原理：亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物，胺類化合物在強酸下條件形成。本步反應中沒有使用任何亞硝基化合物，使用了N,N-二甲基甲酰胺作溶劑，使用鹽酸具備強酸條件，但因缺少亞硝基化合物不會有亞硝胺雜質形成?？紤]到工藝中反應溫度98℃左右二甲基甲酰胺可能降解為二甲胺，假設鹽酸和碳酸氫鈉溶液中水含有的微量亞硝基與二甲胺在強酸性條件下反應生產N-二甲基硝基化合物雜質（NDMA）。但這是極低量的存在，可考慮對成品進行測試進一步證實。N,N-二甲基甲酰胺與水、甲醇、二氯甲烷等溶劑混溶，因此其很容易在后續工藝步驟的溶解、水洗、離心、干燥等工序被去除。經對成品采用驗證后的方法測試，連續5批原料藥A中N,N-二甲基甲酰胺含量低于檢測限（2.6ppm），可證實其基本被完全消除。
中間體4工序
以中間體3為原料，無水乙醇為反應溶劑，原甲酸三乙酯為反應試劑，對甲苯磺酸作催化劑，進行醚化反應。醚化反應完成后，加吡啶中和終止反應，離心水洗得到中間體4，主要目的中間體3醚化后通過離心去除特定雜質。
根據亞硝胺雜質生成的原理：亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物，胺類化合物在強酸下條件形成。本步反應中沒有使用任何亞硝基化合物，用到了吡啶為胺類化合物，但沒有水和強酸性條件下，因此不會有亞硝胺雜質形成。吡啶用量少，且與水、甲醇、二氯甲烷等溶劑混溶，其很容易在后續工藝步驟的溶解、水洗、離心、干燥等工序被去除。經對成品采用驗證后的方法測試，連續5批原料藥A中吡啶含量低于檢測限（1.6ppm），可證實其基本被完全消除。
中間體5工序
以中間體4為原料，二甲基甲酰胺為溶劑，加鹽酸水解3位乙?；?，反應完成后加入碳酸氫鈉水溶液水析中和鹽酸，離心水洗干燥得到中間體5。
根據亞硝胺雜質生成的原理：亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物，胺類化合物在強酸下條件形成。本步反應中沒有使用任何亞硝基化合物，使用了N,N-二甲基甲酰胺作溶劑，使用鹽酸具備強酸條件，但因缺少亞硝基化合物不會有亞硝胺雜質形成?？紤]到工藝中反應溫度98℃左右二甲基甲酰胺可能降解為二甲胺，假設鹽酸和碳酸氫鈉溶液中水含有的微量亞硝基與二甲胺以及上步反應殘留下來的極微量吡啶，在強酸性條件下反應生產N-二甲基亞硝胺雜質（NDMA）。但這是極低的量，可考慮對成品進行測試進一步證實。N,N-二甲基甲酰胺與水、甲醇、二氯甲烷等溶劑混溶，其很容易在后續工藝步驟的溶解、水洗、離心、干燥等工序被去除。經對成品采用驗證后的方法測試，連續5批原料藥A中N,N-二甲基甲酰胺含量低于檢測限（2.6ppm），可證實其基本被完全消除。
XXXX粗品制備工序
中間體5為原料，二氯甲烷和甲醇混合溶劑溶解，加活性炭脫色，回流后過濾活性炭，常壓濃縮，留甲醇母液，離心得濕料。濕料用N,N-二甲基甲酰胺溶解，冷卻重結晶，淋洗、干燥得到粗品。
根據亞硝胺雜質生成的原理：亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物，胺類化合物在強酸下條件形成。本步反應中沒有使用任何亞硝基化合物，用到了N,N-二甲基甲酰胺為胺類化合物，但沒有水和強酸性條件下，因此不會有亞硝胺雜質形成。N,N-二甲基甲酰胺與甲醇、二氯甲烷等溶劑混溶，其很容易在后續工藝步驟的溶解、離心、干燥等工序被去除。經對成品采用驗證后的方法測試，連續5批原料藥A中N,N-二甲基甲酰胺含量低于檢測限（2.6ppm），可證實其基本被完全消除。
XX精制品工序
XX粗品為原料，二氯甲烷和甲醇混合溶劑溶解物料，活性炭脫色?；亓骱筮^濾活性炭，常壓濃縮，留甲醇母液，離心、干燥得到原料藥A。
根據亞硝胺雜質生成的原理：亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物，胺類化合物在強酸下條件形成。本步反應中沒有使用任何亞硝基化合物和胺類化合物，也沒有水和強酸性條件下，因此不會有亞硝胺雜質形成。
1.4.2 工藝中回收溶劑的討論
本公司原料藥A高版本XXXX產品不涉及任何回收溶劑的使用，因此不會因為溶劑回收引入亞硝胺雜質的風險。
需要說明的是，原料藥A低版本1212涉及回收溶劑的使用，如：N,N-二甲基甲酰胺，回收甲醇-二氯甲烷混合溶劑等。但本公司低版本或化工級別的產品回收溶劑使用均有明確的工藝規程支持，同時回收溶劑的回收設備是固定的，不存在委托第三方或溶劑使用后返還供應商代為回收的情況。本公司回收溶劑的回收工藝、質量標準、測試方法等均是書面批準的。回收溶劑使用必須符合兩個條件，一是回收溶劑只用在同一步驟，即在哪步使用回收后仍用于該步驟；二是精制步驟回收溶劑可用于粗品步驟，反之則不行。本公司高版本和低版本產品在同一生產線上間隔生產，更換版本生產前會使用經清潔驗證有效的設備清潔規程徹底的進行二次清潔，設備在清潔烘干后使用。同時本公司高版本產品可以降級為低版本產品銷售，但低版本產品不得作為或混入高版本作為高版本產品使用銷售。因此，低版本產品生產使用回收溶劑，不會給高版本產品引入亞硝胺雜質風險。
1.4.3 生產和工藝管理的討論
本公司原料藥A生產工藝經過持續工藝驗證證明是具有穩定性和一致性的，能生產出安全、有效、穩定均一的產品。整個生產過程是有計劃的，嚴格按照各步驟詳細的生產操作規程進行的且有生產記錄支持的。生產過程中車間管理人員和QA會檢查復核，若一旦發生偏差，操作人員會上報管理人員和QA并按照偏差處理程序調查。因此因未按照工藝規程進行或操作失誤導致亞硝胺雜質引入原料藥A的風險極低。
1.4.4 人員
原料藥A生產人員均經過人員衛生、工作服管理或人員進出潔凈區管理等培訓并考核合格。合成區人員操作時穿工作服戴頭盔和手套，潔凈區人員穿潔凈區工作服，戴口罩和手套等。生產人員不得有外傷也不得有傳染病，整個生產過程中人員與物料無直接接觸。因此原料藥A涉及的人員帶來的亞硝胺雜質風險也極低。
2 風險分析
評估團隊根據魚骨圖評估所有因素后，認為亞硝胺雜質帶入原料藥A成品的可能性極低。但考慮到飲用水和其它物料中不可避免的含有微量的亞硝基化合物，生產過程也用到了N-甲基苯胺、N,N-二甲基甲酰胺和吡啶等胺基化合物，同時有強酸條件，因此需要對原料藥A中N-亞硝基二甲胺（NDMA）、N-亞硝基二乙胺（NDEA）、N-亞硝基甲基苯胺（NMPA）含量進行測試，以證實上述分析是否合理。
2021年4月，化驗室對原料藥A中上述亞硝胺雜質進行了測試。測試結果顯示5批原料藥A（批號分別為2009001，2009002，2009003，2009004，2009005）中N-亞硝基二甲胺（NDMA）、N-亞硝基二乙胺（NDEA）、N-亞硝基甲基苯胺（NMPA）中的亞硝胺雜質均為未檢出。而原料藥A中N-亞硝基二甲胺（NDMA）、N-亞硝基二乙胺（NDEA）、N-亞硝基甲基苯胺（NMPA）測試方法的檢測限分別為0.019ppm，0.0053ppm，0.0069ppm。結合原料藥A制劑最大日劑量為800mg，原料藥A中未檢出完全符合指南推薦的上述亞硝胺雜質含量最小限值為0.03ppm，不超過26.5 ng/天的限度。樣品測試前進行了方法的專屬性、線性和準確度等項目的考察，結果均為符合要求。
注：若原料藥檢測后發現有一種或幾種亞硝胺雜質，切記應按照指南執行一系列的活動，如:計算總限度，擴大檢測批次范圍，查找根本原因，采用降低亞硝胺雜質措施，放行測試，通報官方等等。
3 風險評估
基于風險識別和分析的情況以及連續5批原料藥A中N-亞硝基二甲胺（NDMA）、N-亞硝基二乙胺（NDEA）、N-亞硝基甲基苯胺（NMPA）含量測試結果，同時考慮本公司GMP體系運行情況，我們評估原料藥A產品中亞硝胺雜質的風險程度極低。
4 風險控制
基于風險評估情況，亞硝胺雜質不加入到原料藥A的質量標準中，即不包括在放行測試中，但需要定期監測。在沒有發生可能影響亞硝胺雜質的變更情況下，本公司按照每三年測試一次，每次至少三個連續批次的測試頻率（優先考慮每三年一次的工藝再驗證批次），測試項目為N-亞硝基二甲胺（NDMA）、N-亞硝基二乙胺（NDEA）、N-亞硝基甲基苯胺（NMPA）三種雜質含量。
5 風險審核
原料藥A生產全過程發生以下情況時，需要重新進行評估：
原料藥A生產工藝和或主要物料發生顯著變更;
生產關鍵設備和或與物料直接接觸的管道或儲罐，備品備件發生變化時;
發現新的亞硝胺雜質出現的根本原因或條件時；
GMP體系發生重大變化時；
原料藥A中測試出亞硝胺雜質時，等等.
6 風險溝通
我們承諾與客戶分享原料藥A亞硝胺雜質的評估情況。必要時，也將在產品注冊時或產品批準后向相關法規官方匯報相關的評估信息。
編者：EDQM和FDA指南提供了各種條件和因素描述可供參詳。因本人水平有限，多有不當之處提請讀者指正和包涵。
