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實驗室霉菌毒素檢測方法的建立

酶聯免疫吸附法

酶聯免疫吸附法（Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay，ELISA）是一種利用抗體和抗原之間的專一性將其結合，對目標化合物進行檢測的方法。

優點：

特異性強、靈敏度高、操作簡單，試驗過程中無需昂貴的試驗儀器等優點。但是該方法所需抗原、抗體的制備需要較高的專業技術水平，且通常只能檢測一種物質，因此，多被用于快速篩選檢查。目前，已有多種ELISA檢測試劑盒問世，主要包括AFB1、OTA、ZEN、DON等。

缺點：

使用酶聯免疫吸附法受到檢測樣品數量的影響，成本投入問題，不能滿足生產一線檢測需求。

膠體金免疫層析法

免疫層析法是20世紀80年代發展起來的一種將膠體金免疫技術和色譜層析技術相結合的固相膜免疫分析方法。其原理是將抗體固定在硝酸纖維素膜(Nitrocellulose filter membrane，NC膜)的特定區域，當NC膜的一端浸入樣品，在毛細管作用下，樣品向前游動，當移動到有抗體的地方時，抗原與抗體特異性結合，一些標記材料帶有顏色，所以結合的地方就會顯示出相應的顏色，從而達到免疫診斷的效果。

優點：

膠體金免疫層析法具有方法操作簡單、檢測時間短，檢測受干擾少，安全性高，污染少，不需要昂貴的檢測儀器適合各類霉菌毒素的快速檢測等優點。

缺點：

成本投入高，不能對霉菌毒素進行定量檢測。

霉菌毒素酶標檢測實驗室具備的檢測條件

1、ELISA專用高端酶標儀

2、霉菌毒素ELISA試劑盒

3、霉菌毒素快速檢測卡

4、移液器、槍頭、離心管

5、技術服務及配套解決方案

霉菌毒素檢測方法的建立

（1）RT-6000酶標儀的操作程序

1、適用范圍

本規程規定了RT-6000酶標儀的操作程序及維護保養注意事項。

2、引用文件：RT-6000酶標儀使用說明書

3、操作程序

3.1  開機，打開電源儀器處于自檢狀態，開機后，等待1分鐘預熱。

3.2  在酶標儀測量項目設置選項中，設置系統參數。

3.3  根據要求編輯測量項目。

3.4  將酶標板放入酶標儀上，選擇測定項目和方法類型，然后在相應空位上點擊實驗序號。

3.5  單擊“開始”按鈕，酶標儀自動進行檢測，測定完成后，結果自動顯示在顯示屏上。

3.6  單擊打印，打印檢測結果，或手工抄錄結果。

3.7  檢測結束，取出酶標板，清潔酶標儀后關機。

4、維護保養及注意事項

4.1  保持酶標儀以及工作環境清潔，光學部分防止塵埃污染。

4.2  液晶顯示器要用柔軟的布清潔

4.3  儀器應在15℃-30℃溫度，相對濕度<85%環境下使用。

4.4  在測試過程中如果有錯誤發生，點擊停止鍵，取消當前測試。

4.4關閉酶標儀，要按照規程操作進行，切勿直接關閉電源。

（2）樣品處理方法

1、試劑盒的回溫，室溫（20-25℃）放置20min。

2、酶標記物工作液和洗液的準備

3、樣品處理

3.1  原料和飼料預處理

采用高速粉碎機粉碎樣品，過20目篩，分析天平準確稱取所需檢測量樣品，置于100mL三角瓶，加入試劑盒規定量的甲醇溶液，搖床震蕩15min，過濾取濾液，作為待檢樣液。

3.2  檢測

3.2.1  取所需量的酶標板條

3.2.2  各反應孔依次加入50μL標準品和樣品。

3.2.3  各反應孔依次加入50μL反應工作液，混勻后，25℃恒溫避光孵育，時間按照試劑盒規定的時間。

3.2.4  洗板

3.2.5  加入100μL顯色劑，25℃顯色10min，顯色完成后加入100μL終止液，酶標儀450nm處檢測吸光值。

幾種霉菌毒素檢測方法特定對照分析表