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嘉峪檢測網 2019-02-15 11:35
1861年Streeker首次從鳥嘌呤的降解產物中發現了胍類產物，此后人們在蛋白、核酸、甜菜、稻殼、人和動物的體內均有發現并對胍類及其衍生物進行了豐富的研究。在上世紀30年代已經有學者發現胍類化合物具有殺菌作用，到50年代英國帝國化學工業公司開發了以氯己定為主要成分的抗菌劑。而新一代胍類消毒劑，即聚六亞基甲基胍出現在90年代。胍類化合物自發現以來迄今已有150余年的歷史，在此期間人們對胍類化合物的制備、性能、毒性、殺菌效果及影響因素等方面進行了研究，發現其具有殺菌效果好、低毒、刺激性小、性能穩定、使用方便等優點，目前已廣泛應用于醫藥、紡織、水處理、生物技術等領域。現就常見胍類消毒劑及其檢測方法研究進展綜述于下。
1 理化性質與應用
1.1 理化性質
化合物中的胍基團是一種不穩定的堿性物質，要使其處于穩定狀態必須形成一種胍鹽形式存在。胍類化合物是指含有胍官能團的化合物或其衍生物。根據不同的制備方法可制得胍鹽、烷基胍類化合物、雙胍類化合物、聚合胍類化合物、環狀胍類化合物等多種胍類化合物。目前我國作為消毒劑應用較多的胍類化合物有醋酸氯己定、鹽酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、聚六亞甲基胍、聚六亞甲基雙胍及其他類似衍生物。氯己定(chlorhexidine)又名洗必泰，屬雙胍類化合物。其化學名稱為1，6-雙氯苯雙胍己烷，分子式c22H30N10Cl2。因氯己定難溶于水，在實際使用中多采用溶解度較好的醋酸氯己定(20℃時溶解度為1.9g/100ml)和葡萄糖酸氯己定(一般為20％的水溶液)作為消毒劑的有效成分。醋酸氯己定和葡萄糖酸氯己定均為白色結晶，可溶于乙醇等溶劑，穩定性好。有實驗表明，室溫條件下500mg/L的醋酸氯己定水溶液可穩定保存3年以上。與醋酸氯己定相比，葡萄糖酸氯己定因具有更好的溶解性、較低的刺激性和過敏性而受到商家及使用者的青睞。
1.2 應用
氯己定類消毒劑屬于低效消毒劑，一般用于手、皮膚和黏膜的消毒，也可用于環境表面和物品的消毒。氯己定制劑種類繁多，但單方制劑獨自使用已不多見，氯己定與其他殺菌成分復配使用，能起到更好的殺菌效果。氯己定碘消毒劑．5也稱洗必泰碘，由氯己定與碘以及酒精復配制得，它綜合了兩種消毒劑的優點，殺菌能力較單方氯己定更強，且溫度升高時其消毒效果也隨之增強。氯己定醇消毒劑由氯己定和乙醇復配制得，一般氯己定濃度按照國家標準GB26367-2010(胍類消毒劑衛生標準》規定，允許在5g/L～40g/L范圍，乙醇濃度65％～75％。氯己定醇消毒劑對細菌繁殖體、病毒、分支桿菌等均有殺滅作用，兩者復配使用，不僅提高了殺菌效果，也加快了殺菌速度。丁卡因氯己定酊是以鹽酸丁卡因和醋酸氯己定為主要成分，用75％乙醇為溶劑制得的醫院常用制劑，在傷口的消炎和止痛上具有良好效果。總之，氯己定在與其他成分復配使用時擴大了殺菌范圍、提高了殺菌速度、增強了消毒效果，在殺菌成分用量減少的同時還降低了其對皮膚的刺激性及可能帶來的不良反應。
2 殺菌機理及影響因素
氯己定是堿性陽離子物質，可通過迅速吸附于細菌表面，破壞其細胞膜，使胞漿組分滲漏而達到殺菌作用¨。在溶液體系中氯己定可抑制細菌代謝酶系統，在較高濃度條件下(1000mg/L)可直接凝聚細胞漿，導致細菌死亡。氯己定的殺菌效果與濃度、pH值、溫度、有機物等因素有關。在一定濃度范圍內，隨著濃度的增加氯己定的殺菌作用增強，如氯己定濃度由100mg/L增加到1000mg/L，其對銅綠假單細胞菌的殺滅時間由15min縮短到5min。pH值對氯己定的殺菌作用有一定影響，pH值在5.5～8.0范圍內具有殺菌活性。溫度和有機物對氯己定的殺菌效果有明顯影響，氯己定溶液隨溫度升高殺菌作用增強；有機物可消耗和吸附消毒液中的氯己定從而降低其殺菌效果，因此，不可用氯己定消毒嚴重污染物品。
3 氯己定分析方法
3.1 滴定分析法
滴定分析法又稱容量分析法，是分析化學中的經典分析方法。其依據物質之間的化學反應關系將已知準確濃度的標準溶液滴加到被測物質的溶液中直至所加溶液物質的量按化學計量關系恰好反應完全，然后根據所加標準溶液的濃度和消耗的體積，計算被測物質的含量。該方法具有簡便、快速、準確度高等特點，一般適用于常量組分的分析。高氯酸滴定法測定消毒劑中的氯己定(包括醋酸氯己定和葡萄糖酸氯己定)是衛生部《消毒技術規范》(2002年版)中規定的第一法，《中華人民共和國藥典》(2010年版)也采用此方法測定醋酸氯己定，而2010年頒布的《GB26367-2010胍類消毒劑衛生標準》中氯己定的測定也按照《消毒技術規范》(2002年版)方法執行。該方法以丙酮為溶劑，甲基橙的飽和丙酮溶液為指示劑，氯己定與高氯酸一冰醋酸標準溶液發生反應，根據反應中消耗的高氯酸量計算氯己定的含量。此方法無需特殊的檢測儀器，凡以氯己定及其鹽類為主要成分的消毒樣品均可采用此法進行含量測定，但計算時應注意系數不同。高氯酸滴定法測定消毒劑中的氯己定簡便易行，但在實際使用中有幾點需特別注意，首先此方法屬于非水溶劑的酸堿滴定，高氯酸一冰醋酸標準溶液一般由700g/L高氯酸水溶液配制而成，其中由高氯酸帶來的水分需通過加人一定量的醋酸酐予以去除；其次此方法僅適用于非水溶液的樣品，若消毒劑為水溶液樣品，則需要在水浴上將水蒸干后再進行測量；此外消毒劑中復配成分多樣，在非水條件下與高氯酸可發生反應的堿性物質對該方法存在干擾，有的消毒劑樣品為淡黃色，樣品本身所帶的顏色會影響甲基橙指示劑的終點識別，因此該方法更適用成分簡單的無色消毒劑樣品或單方制劑。
3.2 分光光度法
分光光度法是根據物質對光的吸收特性而建立起的一種光學分析方法，該方法符合朗伯比爾定律，以待測物的質量濃度為橫坐標，對應的吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，根據樣品的吸光度，在標準曲線上求得其質量濃度。該方法在分析領域應用廣泛。
3.2.1 直接法
氯己定(包括醋酸氯己定和葡萄糖酸氯己定)在259nm處有最大吸收，采用紫外分光光度法可對其含量進行測定。參照2010年版《中華人民共和國藥典》附錄ⅣA采用紫外分光光度法對葡萄糖酸氯己定進行測定，但未能給出詳細操作步驟。李躍紅等叫采用紫外分光光度法對消毒液中氯己定的含量進行了測定。方法最小檢出限為0.5μg/ml，在0~30g/ml之間線性關系良好，高中低三個濃度的加標回收率在92.3％-100.3％之間，樣品相對標準偏差為1.4％。作者采用此方法與2002年版《消毒技術規范》規定的高氯酸滴定法對5個消毒劑樣品進行測定，t檢驗表明兩方法無顯著性差異。與滴定分析法相比，紫外分光光度法測定消毒劑中的氯己定具有簡捷、快速等特點，可直接測定氯己定單方制劑或基體簡單的樣品。對于多組分的復配體系，在259nm附近有吸收的組分干擾含量測定。雙波長分光光度法是解決共存組分干擾的有效手段之一。丁卡因氯己定酊是由鹽酸丁卡因和醋酸氯己定為主要成分的醫院常用制劑，采用紫外分光光度法直接測定醋酸氯己定含量時鹽酸丁卡因會對測量產生干擾，鄭維國等采用雙波長分光光度法同時測定了樣品中的鹽酸丁卡因和醋酸氯己定，該方法中醋酸氯己定的線性范圍在2.51-10.04μg/ml之間，平均回收率為99.76％，RSD為0.93％。醋酸洗必泰漱口液是口腔科常用藥物之一，復配成分糖精鈉干擾樣品含量測定，劉芳等采用雙波長分光光度法有效的消除了糖精鈉的干擾，為制劑的質量控制和常規檢測提供了有效的方法。
3.2.2 間接法
趙桂枝等采用間接法測定了醋酸氯己定的含量，該方法根據醋酸氯己定和茜素絡合物在乙醇-丙酮介質中可發生顯色反應，其反應產物在535nm波長處有最大吸收進行樣品測定；方法在20~100mg/L之間線性關系良好，樣品相對標準偏差為0.7％。此外文章還對吸收光譜、溶劑、顯色時間、溫度、顯色劑的用量等問題進行了討論，試驗結果表明，醋酸氯己定在可見光區無吸收，茜素絡合物的最大吸收波長為435nm，兩者對反應產物的最大吸收波長均不產生干擾，乙醇一丙酮體積比5：5、顯色劑用量在1.5ml時，吸光度最大，顯色時間與溫度對吸光度影響不大。
3.3 液相色譜法
高效液相色譜技術是在20世紀60年代后期發展起來的分離分析技術，經過多年的發展目前已廣泛應用于分析的各個領域。高效液相色譜法測定消毒劑中的氯己定(包括醋酸氯己定和葡萄糖酸氯己定)是衛生部2002年版《消毒技術規范》規定的第二法，也參照《中華人民共和國藥典》附錄VD采用高效液相色譜法對葡萄糖酸氯己定進行測定。兩者方法原理相同，色譜條件略有差異。近年來，許多科研人員也根據樣品的不同情況對方法進行了改進和探討。黃夕野采用高效液相色譜法同時測定了含漱液中的氯己定和甲硝唑。方法采用大連依利特C18色譜柱，甲醇+乙腈+三乙醇胺水溶液(磷酸調節至pH2.5)(45+10+45)為流動相，在259nm波長下檢測，樣品經流動相稀釋后直接進樣，氯己定和甲硝唑在8min內可實現基線分離，兩組分別在17.2～69.0μg/ml和32.9～131.7μg/ml之間線性關系良好，平均回收率分別為95.2％(RSD=1.4％)和93.6％(RSD=1.4％)。作者重點對流動相的pH值進行了探討，pH值小于2或大于8時與色譜柱硅膠相連的化學鍵合相可發生水解或硅膠溶解從而對色譜柱造成損壞，pH值在2.5～4.5間變化時，氯己定的峰形有所改變，pH值2.5時兩組分峰形及分離效果更好。張秉華等采用反相高效液相色潛法對氯已定地塞米松膜中的主要成分氯已定、維生素B和鹽酸達克羅寧進行了測定，三種組分在Symmetry Shield C18色譜柱上經0.5g/L磷酸二氫鉀/甲醇梯度洗脫獲得較好分離，三組分加標回收率在99.2～100.0％之間，相對標準偏差小于1.75％。氯己定在實際應用過程中多與其他成分復配使用從而達到更佳的殺菌效果或通過減少殺菌成分用量從而降低不良反應發生的可能性，碘、乙醇、季銨鹽、鹽酸丁卡因、甲硝唑、地塞米松、中藥等成分是常見的復配組分。采用容量法或分光光度法測定樣品時，一些復配成分干擾測定，高效液相色譜法通過調節流動相組成、配比、pH值或波長可有效解決這些干擾，對某些殺菌組分還可實現同時測定。高效液相色譜法的建立為消毒劑中氯己定有效成分的測定特別是基體復雜的復配消毒劑提供了更為簡潔、靈敏的實用方法。
3.4 毛細管電泳法
毛細管電泳又稱高效毛細管電泳，是一類以石英毛細管為分離通道、以高壓直流電場為驅動力，依據樣品中各組分之間的淌度和分配行為上的差異實現分離的新型液相分離技術。其具有分離速度快、溶劑和試樣消耗少、選擇性強等特點，使分析化學從微升水平進入到納升水平。
鄒曉莉等建立了毛細管電泳法測定消毒劑中的醋酸氯己定。該方法采用15mmol/L磷酸鹽乙腈(體積比為60/40)緩沖體系，在50cmx751μm的石英毛細管柱上對醋酸氯己定進行電泳分離，電泳電壓15kV，檢測波長254nm，樣品在4min內可完成分析。作者系統地研究了影響測定結果的各種因素，對緩沖溶液的種類、濃度、pH值、電泳電壓等分析條件進行了優化。該方法檢出限為0.004mg/L，醋酸氯己定在0.01～0.1g/L方位內線性關系良好，樣品加標回收率在91.4％～116.6％之間，相對標準偏差小于3.97％。作者還將此方法與高效液相色譜法進行比較，兩種方法測定結果的相對誤差小于4％。
3.5 原子吸收光譜法
原子吸收光譜法也稱原子吸收分光光度法，是基于氣相中待測元素的基態原子對其共振輻射的吸收強度來測定試樣中該元素含量的一種儀器分析方法。原子吸收光譜法因靈敏度高、選擇性好、抗干擾能力強而廣泛應用于分析領域，但該方法主要用于金屬元素的分析，隨著科技的快速發展將其應用于非金屬元素和有機化合物的測定成為可能u，將原子吸收光譜用于分子吸收的研究工作也逐漸增加。
吉鐘山等將原子吸收光譜儀以非原子化法測定醋酸氯己定。該方法在0～100mg/L之間線性關系良好，高中低三種濃度平均加標回收率在96.2～111.36％之間，相對標準偏差在0．192％-1.32％之間。作者利用本方法和《消毒技術規范》規定的高氯酸滴定法對6份樣品進行測定，t檢驗結果表明兩種方法無顯著性差異。該方法的建立拓寬了原子吸收光譜分析的應用領域。比較上述幾種檢測方法，滴定分析法和分光光度法相對簡便，在人員與設備方面要求較少，但在使用過程中易受復配成分的干擾而影響測定結果的準確性；液相色譜法和毛細管電泳法是更為靈敏和準確的測定方法，可通過條件優化有效解決復配成分的干擾問題，隨著大型儀器的普及，這兩種方法也成為目前較為常用的方法；原子吸收光譜法簡便、快速，為實驗室檢測提供了新的技術手段。總之，每種檢測方法各具特點，各有所長，檢測人員可根據待測樣品基體復配情況、實驗室儀器配置條件及對實驗結果的要求合理選擇。
來源：AnyTesting
