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1. 實(shí)驗(yàn)原理

瑞士卷制片結(jié)合 HE 染色是經(jīng)典的腸道全層結(jié)構(gòu)觀察方法。通過將結(jié)腸卷曲成瑞士卷形態(tài)，可在單一切片中完整展現(xiàn)黏膜層、黏膜下層及肌層的連續(xù)病理變化（如炎癥、隱窩結(jié)構(gòu)異常等）。該技術(shù)尤其適用于小鼠模型腸道疾病研究，具有保留全結(jié)腸組織、維持組織結(jié)構(gòu)完整性、簡化制片流程等優(yōu)勢。

結(jié)腸瑞士卷的免疫組織化學(xué)染色代表性圖像

（圖片來源：https://doi.org/10.1016/j.mex.2022.101630）

傳統(tǒng)方法局限性：

國外方法：既往研究多參考 JOVE 實(shí)驗(yàn)視頻指導(dǎo)，采用木棍機(jī)械頂出腸內(nèi)容物后沖洗，此過程易因機(jī)械力損傷腸黏膜結(jié)構(gòu)，影響后續(xù)病理觀察。

國內(nèi)方法：需沿中線剖開腸管后沖洗，但對操作者技術(shù)要求較高，若未精準(zhǔn)沿中線解剖，易導(dǎo)致腸管形態(tài)不規(guī)則，造成檢材浪費(fèi)。離體腸管痙攣問題：腸道離體后因去神經(jīng)化發(fā)生痙攣，直接沖洗時腸內(nèi)容物難以排出，且操作不當(dāng)可能撕裂組織，破壞完整性。

瑞士卷技術(shù)改進(jìn)：

本方法通過保留系膜緣側(cè)結(jié)構(gòu)，保留在體神經(jīng)支配，避免腸管痙攣，并優(yōu)化沖洗流程，避免機(jī)械頂壓和剖解操作，有效減少黏膜損傷；同時利用腸道自然張力完成沖洗，確保組織形態(tài)完整，為病理分析提供更可靠的樣本基礎(chǔ)。

2. 實(shí)驗(yàn)材料

耗材：1 mL 移液器及槍頭、眼科鑷、手術(shù)剪、凍存管

試劑：PBS 緩沖液、krebs 液（可選）、4% 多聚甲醛固定液

設(shè)備：解剖臺、冰盒、顯微鏡（可選）

3. 實(shí)驗(yàn)步驟

3.1 小鼠處死與腹腔暴露

1.禁食處理：實(shí)驗(yàn)前根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要看是否需 12-16 h對小鼠進(jìn)行禁食（不禁水），減少腸內(nèi)容物干擾。

2.頸椎脫臼法處死：快速處死小鼠，立即置于解剖臺，75% 酒精消毒腹部。

3.解剖操作：沿中線剪開腹壁，暴露腹腔，定位回盲部囊袋樣結(jié)構(gòu)，確認(rèn)遠(yuǎn)端結(jié)腸（粗細(xì)交界處）。

3.2 結(jié)腸沖洗與分離

1.腸管切斷：在結(jié)腸粗細(xì)交界處（系膜緣側(cè)保留約 2 mm）剪斷腸管，避免損傷系膜血管。

2.沖洗技巧：

用 1 mL 移液器吸取 PBS 或 krebs 液，水平插入腸管斷端（保持移液管與腸管方向一致，避免成角）。

輕柔推注液體，觀察腸內(nèi)容物排出，確保結(jié)腸無明顯擴(kuò)張。可通過流出的清亮液體，判斷是否沖洗干凈，一般2-3次沖洗即能達(dá)到滿意效果。

3.解剖系膜：沿肛側(cè)方向剝離系膜組織，完整游離結(jié)腸至肛門端。

3.3 瑞士卷制片

1.組織固定：將沖洗后的結(jié)腸立即浸入 4% 多聚甲醛固定液中，室溫固定 24 h。

2.卷曲制片：

取固定好的結(jié)腸，置于濾紙上，用眼科鑷將腸管末端向系膜側(cè)卷起，形成緊密的瑞士卷結(jié)構(gòu)。

用細(xì)線固定卷芯，放入包埋盒中進(jìn)行石蠟包埋。

3.切片染色：切片厚度 4-5 μm，進(jìn)行 HE 染色后封片觀察。

4. 注意事項

處死小鼠后需快速操作，避免組織自溶。

沖洗時壓力不宜過大，防止腸黏膜損傷。

瑞士卷卷曲過程中需保持腸管自然形態(tài)，避免過度拉伸或折疊。

系膜剔除需徹底，以免影響切片質(zhì)量。

5. 參考資料

[1] 腸道組織制片技術(shù)規(guī)范（實(shí)驗(yàn)動物科學(xué)，2020）

[2] Swiss-roll technique for histological analysis of gastrointestinal tissues (Nature Protocols, 2018)

[3] JOVE 實(shí)驗(yàn)視頻：Intestinal Tissue Processing for Histology