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嘉峪檢測網(wǎng) 2021-02-18 23:16
溶出度測定在目前仿制藥研究領(lǐng)域中具有重要作用，溶出數(shù)據(jù)的可靠性與溶出方法的耐用性息息相關(guān)。本文對溶出方法的耐用性進行闡述，表明影響溶出方法耐用性的因素。
一、溶出方法
溶出是唯一的能監(jiān)測體外藥物釋放的速率和程度的批次釋放測試，并且該測試通常用作確保替代物體內(nèi)性能一致已被廣泛接受。溶出度測試已經(jīng)從作為最終產(chǎn)品常規(guī)和簡單測試演變?yōu)殚_發(fā)人員可以在產(chǎn)品生命周期的各個階段都起作用的重要工具，目前有溶出方法普遍認為有三種：QC溶出方法、生物相關(guān)溶出方法、臨床相關(guān)溶出方法。
QC溶出方法的目的是檢測常規(guī)產(chǎn)品制造期間的變化和/或產(chǎn)品存儲期間可能對產(chǎn)品性能產(chǎn)生負面影響的變化。生物相關(guān)溶出方法的目的是嘗試模擬藥物在胃腸道內(nèi)將經(jīng)歷的不同生理環(huán)境，其總體目標是指導(dǎo)制劑選擇和優(yōu)化，但這并不一定能推斷該方法可以預(yù)測臨床結(jié)果。臨床相關(guān)溶出方法是通過將任何特定方法獲得的體外溶出數(shù)據(jù)與體內(nèi)PK性能數(shù)據(jù)相關(guān)聯(lián)，建立臨床相關(guān)的溶出方法，產(chǎn)生體外體內(nèi)相關(guān)性或關(guān)系（IVIVC或IVIVR）。目前在仿制藥開發(fā)過程中溶出方法都希望是后續(xù)兩個方法，但實際上在沒有體內(nèi)數(shù)據(jù)和生物相關(guān)介質(zhì)高昂成本下還是QC溶出方法居多。下文中討論的主要是QC溶出方法。
開發(fā)QC溶出度測試的重點是獲得可接受的可變性同時在一定程度上實現(xiàn)對工藝參數(shù)變化的一些區(qū)分。如果批次的藥品在選定的溶出實驗中顯示“相同”，它們將產(chǎn)生與臨床研究中使用的批次相似的體內(nèi)性能，從而保持與安全性和有效性的聯(lián)系。例如，QC溶出方法應(yīng)該能夠識別制粒不夠或過度制粒，硬度不夠或硬度過大的產(chǎn)品，或者其中API的關(guān)鍵屬性發(fā)生有重大變化的產(chǎn)品（例如，顆粒形態(tài)）或者關(guān)鍵賦形劑，例如表面活性劑，制粒助劑，崩解劑，潤滑劑發(fā)生變化的產(chǎn)品。在這個目的下，溶出度方法應(yīng)該具有一定的區(qū)分性。而區(qū)分性不應(yīng)有溶出自身方法耐用性不良造成數(shù)據(jù)波動引起。因此溶出方法本身應(yīng)具良好的耐用性。
二、耐用性
按照ICHQ2，分析方法的耐用性是指在實驗參數(shù)被故意的發(fā)生細小改變時，檢測不受影響的能力，用于說明正常使用時的柔韌性。
溶出度實驗是性能實驗和檢測方法的綜合，是指由溶出裝置，溶出介質(zhì)和測試條件，共同組成一個方法，這個方法能夠反應(yīng)產(chǎn)品的關(guān)鍵屬性變化，同時能夠運用于日常操作，并且能夠進行實驗室之間的轉(zhuǎn)移。理想的溶出方法不會有不可接受的變異性，并且能夠?qū)⒉粫暙I一個不可接受的程度的變異。因此溶出度實驗的耐用性包括檢測方法耐用性和溶出性能實驗的耐用性。
三、檢測方法耐用性
中國藥典2020年版《9101分析方法驗證指導(dǎo)原則》征求意見稿中含量測定及溶出量測定需要進行耐用性檢測。
ICHQ2中耐用性取決于研究條件下分析方法的類型，對于方法參數(shù)的有意變動，分析方法應(yīng)顯示可靠性。耐用性評價的一個結(jié)果是建立一系列系統(tǒng)適用性參數(shù)來確保分析方法不管在什么用都是有效的。
溶出檢測分析方法目前較為主流的是紫外分光光度法和高效液相色譜法。兩者各有利弊，耐用性所做項目不同。對于紫外分光光度法來說，主要耐用性考察不同檢測波長（±2nm）。
高效液相色譜法分析參數(shù)包括流動相成分（有機相的百分比、緩沖液濃度、pH）、流速、波長、柱溫、同一類型的多根色譜柱等。
耐用性實驗除了在標準介質(zhì)中需要進行，在其他介質(zhì)中同樣需要進行驗證。筆者有做過一個項目，不同介質(zhì)間由于pH差異對API性質(zhì)有比較大的影響，標準介質(zhì)中無異常現(xiàn)象，在其他介質(zhì)中則驗證通不過，后發(fā)現(xiàn)其他介質(zhì)樣品需要調(diào)節(jié)至標準介質(zhì)pH值才解決問題。
四、溶出實驗的耐用性
溶出性能實驗包括溶出裝置、溶出介質(zhì)和測試條件，因此影響耐用性也包括這些方面，且溶出性能測試耐用性需要在初始溶出度方法開發(fā)階段就需要考察。
溶出裝置根據(jù)劑型和各國藥典有不同類型，常用的為槳法、籃法、流通池法。根據(jù)不同方法耐用性有所不同。
對筆者而言，溶出性能實驗?zāi)陀眯愿袢艹龇椒ǖ暮Y選、確認過程。正如上文所說，溶出性能實驗包括溶出裝置（主要討論第一法和第二法）、溶出介質(zhì)和測試條件，耐用性實驗也圍繞這些展開。
1、儀器裝置
在目前的法規(guī)條件下，溶出儀裝置都需要做機械校正。因此溶出方法應(yīng)在不同的溶出儀之間無明顯差異。按照2016年第120號通告附件《化學(xué)藥品仿制藥口服固體制劑質(zhì)量和療效一致性評價申報資料要求（試行）》規(guī)定：在耐用性實驗中，應(yīng)考察溶出曲線測定方法在不同溶出儀器上的差異。列表表示同一批樣品在不同溶出儀上的溶出數(shù)據(jù)，并比較溶出曲線的差異。示例如下：
表xx：耐用性結(jié)果
在該申報資料中需比較溶出度各個時間點的差異，但未規(guī)定差異多大符合要求，筆者認為各個時間點的差異不應(yīng)大于10。
在比較不同溶出儀差異時，如果實驗室有手動取樣和自動取樣溶出儀，那么手動取樣和自動取樣之間的差異需要重點關(guān)注，自動取樣由于管路材質(zhì)、泵系統(tǒng)（柱塞還是蠕動，柱體及活塞的材質(zhì)）、閥切換系統(tǒng)等的復(fù)雜性使過程中出現(xiàn)異常概率較大，由于其裝置的復(fù)雜性與手動取樣有所差異，需要進行考察。
某些樣品如果對金屬離子比較敏感，如苯磺酸氨氯地平在鹽酸介質(zhì)中不銹鋼槳會使其降解，則對溶出的桿/槳需要有特殊的要求，如采用特氟龍涂層，在方法前期摸索和確認過程中需要對異常數(shù)據(jù)關(guān)注，后期在整個研發(fā)和生產(chǎn)過程中都需特別說明。
2、溶出介質(zhì)
溶出介質(zhì)是溶出性能實驗的核心部分，溶出方法的篩選、耐用性實驗大部分集中在此。溶出介質(zhì)包括試劑來源、pH、介質(zhì)摩爾濃度、表面活性劑濃度、介質(zhì)脫氣與否等。
2.1、試劑來源
試劑中影響較大的可能為水，不同來源的水可能會對溶出數(shù)據(jù)有不同的影響。在其他試劑中，常用的緩沖鹽影響不大，影響較大可能為表面活性劑來源。不同來源的表面活性劑純度、雜質(zhì)、增溶能力不同，甚至于同一廠家的不同批號之間也有差異，因此實驗結(jié)果也會不同。筆者就此有過教訓(xùn)，在篩選吐溫80時，國產(chǎn)吐溫與進口吐溫?zé)o差異，使用國產(chǎn)吐溫一段時間后發(fā)現(xiàn)不同批號差異很大，最后浪費了較長時間。因此在確認表面活性劑時需要考察不同廠家、不同批號之間的差異。
2.2、pH
pH對于某些藥物的溶出影響非常大，特別是pH溶解依賴型藥物。在藥事縱橫公眾號中Herman翻譯過一篇文章《看明白新藥如何開發(fā)溶出方法，才能做好仿制藥》詳細闡述了pH耐用性的重要性。在此筆者不展開分析，只截取一段表明pH耐用性的重要性：當(dāng)pH增加0.2時，每個點的溶出約降低10%。pH的微小改變導(dǎo)致溶出較大的改變，表明依賴于的溶出方法耐用性不佳。在介質(zhì)pH（pH4.0）確定后，同樣進行了pH耐用性考察，見下表：
從上文可以看出，介質(zhì)pH的選擇對溶出影響較大，特別是pH-依耐性溶解的藥物，在pH選擇上更要慎重。
2.3、介質(zhì)摩爾濃度
不同的離子濃度對某些藥物的溶出釋放有顯著作用。研如玉公眾號有篇《評估溶出介質(zhì)的組成和離子強度對商業(yè)化生產(chǎn)的阿司匹林速釋制劑和腸溶片釋放的影響》詳細介紹了離子種類和濃度的影響。值得注意的是日本藥典和我國目前使用的pH6.8介質(zhì)離子濃度有差異。對筆者而言，介質(zhì)摩爾離子濃度不會太關(guān)注，如果一開始使用的就是該濃度，在整個研究過程一致即可。
2.4、表面活性劑濃度
表面活性劑種類和濃度都需要進行篩選。同樣是《看明白新藥如何開發(fā)溶出方法，才能做好仿制藥》中提到了：在不同pH介質(zhì)中加入SLS，會導(dǎo)致達沙替尼相變，最終形成一種粘性的非晶相。這說明SLS不合適。篩選其他幾個非離子型表面活性劑包括泊洛沙姆、溴化十六烷基三甲基銨、TritonX-100。最終選擇TritonX-100，因為其使用方便，易于獲得。因此表面活性種類需要進行篩選。而在確認使用TritonX-100后，其濃度耐用性同樣進行驗證：體積比分別為0.5%、0.75、1.25%。圖7表明使用0.75、1.25%，與1%的溶出曲線的相比，計算f2因子，分別為72、68，表明在±0.25%范圍內(nèi)，耐用性良好。表面活性劑±2.5mL/L是可以接受的。
通過上述案例可以看出，對于使用表面活性劑的溶出性能方法，表面活性劑的種類、廠家、批號、濃度等都屬于耐用性影響因素范疇。表面活性劑的濃度需根據(jù)溶解度數(shù)據(jù)和溶出數(shù)據(jù)確認。對筆者而言，表面活性劑濃度耐用性會控制在±5%的波動。
2.5.介質(zhì)脫氣
介質(zhì)中氣體在某些情況下對藥物溶出影響較大，特別是籃法或者某些緩釋藥物。目前，《中國藥典》對溶出實驗中所使用的溶出介質(zhì)已明確提出了脫氣的要求。但如果研發(fā)過程中由于脫氣機普及性可證明脫氣與不脫氣區(qū)別，沒有影響的可不脫氣。
3、測試條件
測試條件包括轉(zhuǎn)速、溫度、取樣時間等。目前對溶出儀的機械校準有轉(zhuǎn)速（±4%）、溫度（37℃±0.5℃）的要求。因此對于已確定溶出方法的轉(zhuǎn)速耐用性則不需要進行。溫度在常規(guī)操作條件下也不需要進行耐用性考察，但是余力老師在一次同寫意培訓(xùn)課上講過某個產(chǎn)品復(fù)核時37℃數(shù)據(jù)在邊緣區(qū)，廠家過來將溫度調(diào)節(jié)至37.5℃數(shù)據(jù)符合要求。因此個人認為如果遇到這種對溫度波動異常敏感的除了在每次實驗前對每個溶出杯的杯溫測試外，還應(yīng)對溶出方法進行一定的耐用性考察和優(yōu)化。
取樣時間中國藥典2015版0931《溶出度與釋放度》中規(guī)定應(yīng)按照品種各論中規(guī)定的取樣時間取樣，自6杯中完成取樣的時間應(yīng)在1min中內(nèi)。故在取樣時應(yīng)注意每次取樣時間。
同時需要注意取樣針的問題。文獻《Differences in In Vitro Dissolution Rates Using Single Point and Multi-Point Sampling》介紹了由于單點取樣和多點取樣由于取樣針的差異造成溶出度差異。在多點取樣期間，在30分鐘時間點之前，探針在10分鐘和20分鐘時間點的每一個時間點浸入介質(zhì)中達90秒鐘。盡管相對較短，但是這種探針浸入時間可能會導(dǎo)致容器內(nèi)的流體中斷并在流動中引入湍流。在單點取樣過程中，探針不與介質(zhì)接觸，直到在30分鐘的時間點抽取單個樣品。與單點取樣相比，多點取樣增加了溶解容器中流體動力流動的中斷，導(dǎo)致藥物在30分鐘時間點的釋放更快。
四、結(jié)論
溶出方法的耐用性包括溶出性能實驗?zāi)陀眯院蜋z測方法耐用性。溶出實驗的耐用性在前期溶出實驗條件確定時進行，可能會由于溶出實驗因素（實驗儀器、介質(zhì)、取樣條件、操作、環(huán)境等）影響貫穿于整個研發(fā)過程。檢測方法耐用性考察相對來說能夠確定，沒有太多因素干擾。溶出性能實驗?zāi)陀眯钥疾煨枰鶕?jù)不同的藥品本身的性質(zhì)和劑型的特征不同區(qū)分，沒有統(tǒng)一的標準，需要對項目本身的科學(xué)理解和研究來證明該溶出實驗方法是耐用的。
參考文獻：
1、ICH Q2B 分析方法驗證
2、USP 1092 溶出度實驗的開發(fā)和驗證
3、中國藥典2015版 0931 溶出度與釋放度
4、Limin Zhang, Khanh Ha, Brent Kleintop, Shannon Phillips，Barry Scheer Differences in In Vitro Dissolution Rates Using Single-Point and Multi-Point Sampling
5、藥事縱橫 herman 看明白新藥如何開發(fā)溶出方法，才能做好仿制藥
6、研如玉行者評估溶出介質(zhì)的組成和離子強度對商業(yè)化生產(chǎn)的阿司匹林速釋制劑和腸溶片釋放的影響
7、Haiyan Grady, David Elder,Gregory K. Webster, Yun Mao, Yiqing Lin, Talia Flanagan, James Mann, Andy Blanchard, Michael J. Cohen, Judy Lin, Filippos Kesisoglou, Andre Hermans, Andreas Abend, Limin Zhang, David Curran Industry’s View on Using Quality Control, Biorelevant and Clinically Relevant Dissolution Tests for Pharmaceutical Development,Registration and Commercialization
來源：Internet
