您當前的位置：檢測資訊 > 科研開發
嘉峪檢測網 2025-04-17 20:24
摘 要： 建立反相高效液相色譜法同時測定降脂通便膠囊中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚5種蒽醌含量。樣品用甲醇回流提取后用硫酸水解，用三氯甲烷萃取，以Sepax Bio-C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱分離，以甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液（體積比為23∶42∶35）為流動相，流量為1 mL/min，檢測波長為254 nm，柱溫為35 ℃。5種蒽醌的質量分別在0.058 8～0.352 8、0.703 6～4.221 6、0.067 2～0.403 2、0.083 6～0.501、0.105 8～0.634 8 μg范圍內與色譜峰面積呈良好的線性關系，相關系數均不小于0.999 8，方法檢出限為0.001 5～0.004 2 μg/mL，定量限為0.004 7～0.013 3 μg/mL。樣品加標平均回收率為96.47%～98.35%，測定結果的相對標準偏差為1.1%～2.0%（n=6）。該方法滿足降脂通便膠囊中5種蒽醌成分的測定要求，可以為降脂通便膠囊的質量控制提供一定的技術參考。
關鍵詞： 高效液相色譜法； 降脂通便膠囊； 蒽醌
降脂通便膠囊是由酒大黃、人參、玄明粉、靈芝等6味中藥材組成的中成藥制劑，其功能為瀉熱通便、健脾益氣，用于治療腸胃實熱、脾氣虧虛所致的大便秘結、腹脹納呆、形體肥胖、氣短肢倦等癥，或由高血脂導致的上述癥狀。根據君臣佐使配伍，其中的君藥為酒大黃，酒大黃為大黃的炮制品，大黃的功效為瀉下攻積、逐瘀痛經、清熱瀉火、涼血解毒、利濕退黃，用于實熱積滯便秘、血熱吐衄、目赤咽腫、擁腫療瘡、腸擁腹痛、瘀血經閉、產后淤阻、跌打損傷、濕熱痢疾、黃疽尿赤、淋證、水腫等疾病的治療，外治燒燙傷；酒大黃更善于清上焦的血分熱毒，亦可用于目赤咽腫、齒齦腫痛[1]。酒大黃中蒽醌主要功效為瀉下、活血化瘀、抗菌止血功效等，其中具有瀉下功效的成分主要是蒽醌類成分，如大黃酸等。降脂通便膠囊目前執行的標準[國家食品藥品監督管理總局國家藥品標準WS-6013 (B-0013)-2014Z]和文獻[2?6]只測定君藥酒大黃中含有的大黃酚和大黃素的總量，并沒有測定酒大黃中其他蒽醌，如大黃酸、蘆薈大黃素和大黃素甲醚的含量。《中華人民共和國藥典》2020年版一部大黃，測定了上述5種成分的總量。目前還沒有同時測定上述5種蒽醌的文獻報道。根據中醫整體觀理論，中藥是一個多成分復雜體系，其中部分成分并不能全部代表其功效和質量，越多的成分表征越能更加全面地對其質量進行控制。筆者參照相關文獻[7?10]，采用反相高效液相色譜法同時測定降脂通便膠囊中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚5種蒽醌成分的含量，為降脂通便膠囊的質量控制提供一定的參考。
1. 實驗部分
1.1 主要儀器與試劑
高效液相色譜儀：U3000型，配二極管陣列檢測器，美國賽默飛世爾科技公司。
分析天平：XS205DualRang型，感量為0.01 mg，瑞士梅特勒-托利多集團。
超聲波清洗器：SK5200HP型，昆山市超聲儀器有限公司。
水浴鍋：HH-16型，上海甘易儀器有限公司。
蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品：純度(質量分數)分別為98.3%、99.3%、98.7%、99.2%、99.3%，批號分別為110758-201817、110757-201607、110756-201512、110796-201621、110757-201607，中國食品藥品檢定研究院。
甲醇、乙腈：均為色譜純，德國默克公司。
磷酸、硫酸、無水硫酸鈉：均為分析純，國藥集團化學試劑有限公司。
0.1%磷酸溶液：吸取1 mL磷酸，置于1 000 mL容量瓶中，加水至標線，搖勻。
實驗用水為超純水。
降脂通便膠囊樣品：市售。
1.2 色譜條件
色譜柱：Sepax Bio-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，蘇州塞分科技股份有限公司)；柱溫：35 ℃；進樣體積：10 μL；檢測器：二極管陣列檢測器(DAD)；檢測波長：254 nm；流動相：甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液(體積比為23∶42∶35)；流量：1 mL/min。
1.3 溶液配制
分別精密稱取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品適量，混合均勻，加入甲醇配制成蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的質量濃度分別為29.4、351.8、33.6、41.8、52.9 μg/mL的混合對照品溶液。
1.4 樣品處理
取降脂通便膠囊(批號為20181105)內容物，混勻，取約0.2 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入25 mL甲醇，稱定質量，置于80 ℃水浴中回流提取30 min，冷卻至室溫，再次稱定質量，用甲醇補足減失質量，搖勻，濾過，精密量取續濾液5.0 mL，置于圓底燒瓶中，于80 ℃水浴中揮去甲醇，加入2.5 mol/L硫酸溶液10 mL，超聲處理5 min，使其溶散，再加入三氯甲烷10 mL，于80 ℃水浴中加熱回流60 min，冷卻至室溫，將溶液轉移至分液漏斗中，用三氯甲烷洗滌容器，洗液并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，剩余溶液用三氯甲烷重復提取2次，每次8 mL，合并三氯甲烷液，用無水硫酸鈉脫水，將三氯甲烷液移至玻璃蒸發皿中，揮去三氯甲烷，加入甲醇使殘渣完全溶解，將溶液轉移至10 mL容容量瓶中，加入甲醇定容至標線，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液即得樣品溶液。
按照降脂通便膠囊制備工藝，制備缺酒大黃藥材的樣品，按樣品溶液制備方法制備陰性樣品溶液。
1.5 定性、定量方法
在1.2色譜條件下，分別測定混合對照品溶液和樣品溶液，根據5種蒽醌的保留時間進行定性，以標準曲線法進行定量。
2. 結果與討論
2.1 目標成分選擇
根據中醫理論的整體性和中藥成分的復雜性，選取降脂通便膠囊制劑中的君藥酒大黃作為研究對象。選取酒大黃中大黃素、大黃酚、大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素甲醚5種蒽醌類成分作為測定的目標成分，與國家食品藥品監督管理總局國家藥品標準WS-6013(B-0013)-2014Z相比，增加了蘆薈大黃素、大黃酸和大黃素甲醚3種成分，能夠更好地體現制劑的質量。
2.2 提取方法選擇
酒大黃中蒽醌類成分的提取方法有超聲提取和回流提取[11?14]，水解溶劑有鹽酸溶液和硫酸溶液[15?17]，萃取溶劑有乙醚和三氯甲烷[18?22]。
分別考察了超聲提取和回流提取兩種提取方法。結果顯示，回流提取后蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚5種蒽醌總含量較超聲提取高，故選擇回流提取。
分別考察了鹽酸和硫酸兩種水解溶劑。結果顯示，硫酸水解用時較短，而且蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚5種蒽醌總含量相對鹽酸水解較高，故選擇硫酸為水解溶劑。
分別考察了乙醚和三氯甲烷兩種萃取溶劑。結果顯示，三氯甲烷萃取后蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚5種蒽醌總含量比乙醚萃取高，而且三氯甲烷層位于下層，較容易分離，故選擇三氯甲烷為萃取溶劑。
2.3 色譜條件選擇
采用二極管陣列檢測器在200～400 nm波長范圍內對混合對照品溶液進行掃描，在波長254 nm處各組分均有較大紫外吸收，且色譜峰的峰形較好，故檢測波長選擇254 nm。
分別考察乙腈-0.1%磷酸溶液、甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液、甲醇-0.1%磷酸溶液3種不同流動相體系時目標物的分離效果。結果表明，以甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液(體積比為23∶42∶35)為流動相時，各組分出峰時間適中，分離度符合要求，故選擇流動相為甲醇-乙腈-0.1%磷酸(體積比為23∶42∶35)。
考察色譜柱柱溫分別為20、25、30、35、40 ℃時的色譜峰形和分離度。結果表明，在上述溫度下，各組分色譜峰沒有顯著差別，為保證色譜條件一致，設置柱溫為35 ℃。
2.4 專屬性試驗
精密吸取混合對照品溶液、樣品溶液和陰性樣品溶液各10 μL，按1.2色譜條件進樣分析，色譜圖如圖1所示。由圖1可以看出，5種蒽醌均能夠很好地分離，分離度均大于1.5，理論塔板數均大于10 000，陰性樣品溶液在相同保留時間處沒有干擾峰，該方法專屬性符合要求。
圖1 混合對照品溶液、樣品溶液和陰性樣品溶液色譜圖
Fig. 1 Chromatograms of mixed reference solution，sample solution，and blank sample solution
2.5 線性方程與檢出限
在1.2色譜條件下，用自動進樣器依次吸取混合對照品溶液2、4、6、8、10、12 μL注入高效液相色譜儀進行測定，以對照品的質量為橫坐標(x)，以對應的色譜峰面積為縱坐標(y)，分別繪制5種蒽醌的標準工作曲線，計算線性方程和相關系數。取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對照品溶液，用甲醇逐級稀釋，在1.2色譜條件下進行測定，以3倍信噪比對應的溶液中目標物的質量濃度為方法檢出限，以10倍信噪比對應的溶液中目標物的質量濃度為定量限。5種蒽醌質量線性范圍、線性方程、相關系數、檢出限及定量限見表1。
表1 質量線性范圍、線性方程、相關系數、檢出限及定量限
Tab. 1 Linear ranges of mass，linear equations，correlation coefficients，detection limits，and quantification limits
2.6 精密度試驗
稱取批號為20181105的樣品6份，按1.4方法平行制備6份樣品溶液，在1.2色譜條件下分別測定5種成分的色譜峰面積，代入標準工作曲線方程計算5種成分的含量，結果見表2。由表2可知，測定結果的相對標準偏差為1.1%～2.0%，表明該方法精密度良好。
表2 精密度試驗結果
Tab. 2 Results of precision test
2.7 加標回收試驗
精密稱取0.1 g樣品，精密加入適量的5種蒽醌對照品，按樣品溶液制備方法平行制備6份加標樣品溶液，在1.2色譜條件下分別進樣測定，結果見表3。
表3 樣品加標回收試驗結果
Tab. 3 Results of sample spiked recoveries test
由表3可知，樣品加標平均回收率為96.47%～98.35%，表明該方法準確度滿足分析要求。
2.8 穩定性試驗
精密吸取同一樣品溶液10 μL，分別在第0、2、4、8、12、24 h進樣分析，測得5種成分含量，結果見表4。由表4可知，測定結果的相對標準偏差為0.5%～1.0%。表明樣品溶液在24 h內穩定性良好。
表4 穩定性試驗結果
Tab. 4 Results of stbility test
3. 結語
建立了高效液相色譜法同時測定降脂通便膠囊中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚5種蒽醌成分含量。對目標成分選擇、提取方法及色譜條件進行了優化。該方法滿足降脂通便膠囊中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚5種蒽醌成分的測定要求，可以為降脂通便膠囊的質量控制提供一定的技術參考。
參考文獻：
1 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2020年版）：一部［M］.北京：中國醫藥科技出版社2020： 24.
Committee of China Pharmacopoeia edit. Pharmacopoeia of the People's Republic of China（2020 Edition）：Part 1［M］. Beijing：Chinese medicine publishing house，2020： 24.
2 田雁鈺，張桂平. HPLC-PDA 法同時測定降脂通便膠囊中6種成分的含量［J］.中南藥學.2020，18（7）： 1 164.
TIAN Yanyu，ZHANG Guiping. Simultaneous determination of 6 constituents in Jiangzhi Tongbian capsules by HPLC-PDA［J］. Central South Pharmacy，2020，18（7）： 1 164.
3 張秋蓉，王麗芳，劉文燕. HPLC 法同時測定膽寧片中5種蒽醌類衍生物含量［J］.中國藥物警戒，2012，9（1）： 3.
ZHANG Qiurong，WANG Lifang，LIU Wenyan. HPLC simultaneous determination of five kinds of anthraquinones in Danning Tablets［J］. Chinese Journal of Pharmacovigilance，2012，9（1）： 3.
4 劉磊，陳婷，成旭東，等. HPLC-DAD法同時測定三黃洗劑中5種成分的含量［J］.亞太傳統醫藥，2019，15（12）： 25.
LIU Lei，CHEN Ting，CHENG Xudong，et al. Simultaneous determination of the content of five ingredients in Sanhuang Lotion by HPLC-DAD［J］. Asia-Pacific Traditional Medicine，2019，15（12）： 25.
5 莊志宏，吳劍坤，姜迪，等. HPLC測定芙蓉散中蘆薈大黃素和大黃酸的含量［J］.首都食品與醫藥，2019，5（2）： 173.
ZHUANG Zhihong，WU Jiankun，JIANG Di，et al. Simultaneous determination the content of aloeemodin and rhein in Furong powders by HPLC［J］. Capital Food Medicine，2019，5（2）： 173.
6 文花，劉燕，董武，等. HPLC 法同時測定蒙藥給喜古訥-6中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量［J］.中國民族醫藥雜志，2019，25（8）： 41.
WEN Hua，LIU Yan，DONG Wu，et al. HPLC simultaneous determination of aloe-emodin，rhein，emodin，chrysophanol and physcion in Mongolian medicine Geixigune-6［J］. Journal of Medicine & Pharmacy of Chinese Minorities，2019，25（8）： 41.
7 陳貴，夏稷子，史娟，等. HPLC法同時測定萱草中蘆薈大黃素和大黃酸的含量［J］. 海峽藥學，2019，31（10）： 73.
CHEN Gui，XIA Jizi，SHI Juan，et al. Simultaneous determination of aloe-emodin and rhein in Hemerocallis fulva L. by HPLC［J］. Strait Pharmaceutical Journal，2019，31（10）： 73.
8 陳小紅. HPLC法測定銀香顆粒中大黃素、大黃酚及大黃素甲醚的含量［J］.中國藥物評價，2019，36（3）： 179.
CHEN Xiaohong. Determination of emodin，chrysophanol and emodin methyl ether in Yinxiang Keli by HPLC［J］. Chinese Journal of Drug Evaluation，2019，36（3）： 179.
9 胡晉娟，凌向陽. HPLC測定清瀉丸中大黃素、大黃酚的含量［J］.廣西中醫學院學報，2009，12（1）： 53.
HU Jinjuan，LING Xiangyang. Determination of emodin and chrysophanol in Qingxie Pills by HPLC［J］. Journal of Guangxi University of Chinese Medicine，2009，12（1）： 53.
10 李開智，姜暉，孫國輝，等. HPLC法測定腎衰寧膠囊中的４種成分［J］.西北藥學雜志，2019，34（6）： 747.
LI Kaizhi，JIANG Hui，SUN Guohui，et al. Simultaneous determination of 4 components in Shenshuaining Capsules by HPLC［J］. Northwest Pharmaceutical Journal，2019，34（6）： 747.
11 張凱東，李姣姣，畢曉艷，等. HPLC法同時測定大黃蟄蟲膠囊中5種成分的含量［J］.沈陽藥科大學學報，2019，36（9）： 813.
ZHANG Kaidong，LI Jiaojiao，BI Xiaoyan，et al. Simultaneous determination of five components in Dahuang Zhechong Capsules by HPLC［J］. Journal of Shenyang Pharmaceutical University，2019，36（9）： 813.
12 顧英琳，張勝波，李正國. HPLC法同時測定決明子與其配方顆粒中2種成分［J］.中成藥，2022，44（11）： 3 636.
GU Yinglin，ZHANG Shengbo，LI Zhengguo. Simultaneous determination of two components in Cassia seed and its formula granules by HPLC［J］. Chinese Traditional Patent Medicine，2022，44（11）： 3 636.
13 肖裕章，付曉，畢海林，等. HPLC-DAD 法同時測定四黃止痢顆粒中5種成分［J］.中獸醫醫藥雜志，2021，40（6）： 61.
XIAO Yuzhang，FU Xiao，BI Hailin，et al. Simultaneous determination of five ingredients in Sihuang Zhili granules by HPLC-DAD［J］. Journal of Traditional Chinese Veterinary Medicine，2021，40（6）： 61.
14 蒙麗斌，潘洪平. HPLC 法同時測定痔瘺洗液中大黃素和大黃酚的含量［J］.中國臨床新醫學，2021，14（9）： 920.
MENG Libin，PAN Hongping. Simultaneous determination of emodin and chrysophanol in Hemorrhoids Fistula Lotion by HPLC method［J］. Chinese Journal of New Clinical Medicine，2021，14（9）： 920.
15 陳宗燕，梁霜. HPLC法同時測定野菠菜中4種蒽醌類成分的含量［J］.中國藥師，2022，25（8）： 1 452.
CHEN Zongyan，LIANG Shuang. Simultaneous determination of four anthraquinones in rumex maritimus by HPLC［J］. China Pharmacist，2022，25（8）： 1 452.
16 許波，袁鳳娟，楊愛華，等.一測多評法同時測定九制大黃丸中5種蒽醌類成分［J］.南通大學學報（醫學板），2021，41（5）： 442.
XU Bo，YUAN Fengjuan，YANG Aihua，et al. Content determination of five anthraquinones in Jiuzhi Dahuang Wan by quantitative analysis of multi-components by a single marker［J］. Journal of Nantong University（Medical Sciences），2021，41（5）： 442.
17 郭新強，姜軍華. HPLC法同時測定六味安消片中大黃素、大黃酚及沒食子酸的含量［J］.藥品評價，2021，18（11）： 661.
GUO Xinqiang，JIANG Junhua. Simultaneous determination of emodin，chrysophanol and gallic acid in Liuwei Anxiao tablets by HPLC［J］. Drug Evaluation，2021，18（11）： 661.
18 楊康，楊小蒨，張愉，等. HPLC 同時測定和胃降逆膠囊中的大黃素和齊墩果酸［J］.華西藥學雜志，2021，36（1）∶73.
YANG Kang，YANG Xiaoqian，ZHANG Yu，et al. Simultaneous determination of emodin and oleanolic acid in Hewei Jiangni capsule by HPLC［J］. West China Journal of Pharmaceutical Sciences，2021，36（1）∶73.
19 肖然.大黃免煎顆粒和大黃飲片有效成分含量對比［J］.智慧健康，2020，6（22）： 32.
XIAO Ran. Comparison of active ingredient contents in Rhubarb free-fried granules and Rhubarb pieces［J］. Smart Healthcare，2020，6（22）： 32.
20 馮亞茹，周榮榮，耿佳樂，等.一測多評法同時測定大黃藥材中8個結合型蒽醌含量的系統研究［J］.藥物分析雜志，2022，42（11）： 1 884.
FENG Yaru，ZHOU Rongrong，GENG Jiale，et al. Systematic study on simultaneous determination of eight anthraquinone glycosides in Rhei Radix et Rhizoma by QAMS［J］. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis，2022，42（11）： 1 884.
21 沈小鐘，崔穗旭，鄭曉娜，等.九華痔瘡栓中大黃素和大黃酚定量方法研究［J］.中國繼續醫學教育，2019，11（15）： 156.
SHEN Xiaozhong，CUI Huixu，ZHENG Xiaona，et al. Study on quantitative method of emodin and chrysophanol in Jiuhua Zhichuang suppositories［J］. China Continuing Medical Education，2019，11（15）： 156.
22 王云，張雪，麻印蓮，等.熟大黃的炮制、藥效及臨床應用研究進展［J］.中國實驗方劑學雜志，2018，24（24）： 219.
WANG Yun，ZHANG Xue，MA Yinlian，et al. Advances in processing，pharmacodynamics and clinical application of prepared Rhei Radix et Rhizoma［J］. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae，2018，24（24）： 219.
引用本文： 汪明志，錢葉飛，張超 . 高效液相色譜法同時測定降脂通便膠囊中5種蒽醌［J］. 化學分析計量，2025，34（1）： 21. (WANG Mingzhi, QIAN Yefei, ZHANG Chao. Simultaneous determination of five anthraquinones in Jiangzhi Tongbian Capsules by high performance liquid chromatography[J]. Chemical Analysis and Meterage, 2025, 34(1): 21.)
來源：化學分析計量
