天堂网www,免费追剧大全在线观看电视剧,97久久精品无码一区二区欧美人 ,日本丰满少妇高潮呻吟

抗菌性水凝膠具有抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的能力，其在傷口護(hù)理等領(lǐng)域有較高的應(yīng)用價(jià)值。在相關(guān)課題研究中，一般研究者選擇金黃色葡萄球菌（S. aureus）、大腸桿菌（E. coli）等細(xì)菌模型來(lái)探究水凝膠的抗菌效果，那么具體的檢測(cè)方法有哪些呢？本期將為大家解讀幾種常見(jiàn)的水凝膠抗菌檢測(cè)手段，并通過(guò)案例分析具體的檢測(cè)方法及結(jié)果。

1.OD值計(jì)數(shù)法

Step1：將一定菌液濃度（約106 CFU/ml）的細(xì)菌懸液與抗菌凝膠孵育12h后（時(shí)間不定，可根試驗(yàn)設(shè)計(jì)調(diào)整抑菌時(shí)間）；

Step1：孵育結(jié)束后將細(xì)菌懸液（稀釋適當(dāng)比例，便于后期計(jì)數(shù)），采用OD值計(jì)數(shù)法計(jì)算抑菌率。

OD值計(jì)數(shù)法免去涂板操作，可直接對(duì)抗菌凝膠作用后的細(xì)菌懸液進(jìn)行OD600吸光度值的測(cè)定，OD值越低，抗菌作用越強(qiáng)。

2.涂布平板法

Step1：將一定菌液濃度（約106 CFU/ml）的細(xì)菌懸液與抗菌凝膠孵育12h后（時(shí)間不定，可根試驗(yàn)設(shè)計(jì)調(diào)整抑菌時(shí)間）；

Step2：，孵育結(jié)束后將細(xì)菌懸液（稀釋適當(dāng)比例，便于后期計(jì)數(shù)）接種至固體營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基表面，37℃培養(yǎng)12-24h后，取出培養(yǎng)皿拍照計(jì)數(shù)，可分別采用平板計(jì)數(shù)法和活死/染色法，計(jì)算抑菌率。

平板計(jì)數(shù)法可通過(guò)明場(chǎng)拍照，利用ImageJ軟件計(jì)算得到抑菌率；

活死/染色法可利用活死細(xì)菌雙染試劑盒分別將活細(xì)菌和死細(xì)菌染上綠色和紅色后，進(jìn)行細(xì)菌活死的鏡檢觀察，該方法更為直觀。

3.抑菌環(huán)法

Step1：將一定體積大小的圓柱形水凝膠樣品或浸潤(rùn)抗菌凝膠溶液的紙片放入均勻涂有細(xì)菌懸液的固體營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基上;

Step2：37℃培養(yǎng)12-24h后，最后測(cè)量抑菌環(huán)大小。

水凝膠的抗菌性能即可由抑菌環(huán)的直徑來(lái)決定，直徑越大則抗菌性能越好，反之則抗菌性能越差。

4.掃描電鏡法（SEM）

Step1：將水凝膠作用后的細(xì)菌經(jīng)2.5%戊二醛溶液于4℃條件下固定40分鐘，

Step2：依次使用濃度為20-100%的乙醇水溶液進(jìn)行梯度脫水后，干燥后進(jìn)行SEM觀察。

通過(guò)SEM圖可直觀看出：空白試樣組處理過(guò)的細(xì)菌細(xì)胞膜是完整光滑的，而抗菌水凝膠處理后的細(xì)菌細(xì)胞膜一般會(huì)發(fā)生皺縮，發(fā)生形變甚至破裂。

案例一

Advanced Science（IF=16.806）納米多巴胺水凝膠提高光熱轉(zhuǎn)換率用以抗菌及傷口愈合 2022.02.22

簡(jiǎn)介：該研究將Ag包裹PDA納米顆粒（PDA@Ag）載入陽(yáng)離子瓜爾膠水凝膠中，利用光熱效應(yīng)實(shí)現(xiàn)抗菌。

參考資料：

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/advs.202106015

圖1  CG/PDA@Ag (CPA2)水凝膠的抗菌性能

檢測(cè)手段：

涂布平板法、掃描電鏡法（SEM）

檢測(cè)結(jié)果：

（1）研究者以S. aureus和E. coli為細(xì)菌模型，利用測(cè)試近紅外光響應(yīng)性抗菌凝膠的抑菌效果，明場(chǎng)圖及CLSM熒光圖表明負(fù)載PDA@Ag納米粒子的瓜爾膠水凝膠（CPA2）在近紅外光（NIR）作用下，能顯著增強(qiáng)凝膠的抗菌作用，單一負(fù)載PDA的水凝膠的光熱性能較弱，不足以殺死細(xì)菌。且熒光檢測(cè)結(jié)果與平板計(jì)數(shù)法結(jié)果具有相同的抗菌趨勢(shì)；

（2）通過(guò)SEM觀察各組凝膠作用處理后的細(xì)菌圖可知，在近紅外作用下，CPA2水凝膠對(duì)細(xì)菌細(xì)胞膜的損傷更為嚴(yán)重，導(dǎo)致細(xì)菌扭曲甚至破裂。結(jié)果表明，CPA2 + NIR抗菌平臺(tái)具有顯著的殺菌作用，可誘導(dǎo)細(xì)菌細(xì)胞膜的破壞。

案例二

ACS Applied Materials & Interfaces（IF=9.229）具有廣泛耐溫性、粘附性和內(nèi)在抗菌特性的新型糖尿病足傷口敷料水凝膠2021.06.07

簡(jiǎn)介：該研究將ε-聚賴氨酸（ε-PL）載入聚丙烯酰胺與明膠的復(fù)合水凝膠中，利用抗菌多肽-聚賴氨酸的抗菌作用實(shí)現(xiàn)抗菌。

參考資料：

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/advs.202106015

圖2 雙網(wǎng)絡(luò)G-PAGL水凝膠的抗菌性能表征

檢測(cè)手段：

抑菌環(huán)法、OD值計(jì)數(shù)法、掃描電鏡法（SEM）

檢測(cè)結(jié)果：

（1）研究者以S. aureus和E. coli為細(xì)菌模型，抑菌環(huán)法顯示，隨著G-PAGL凝膠中聚賴氨酸成分的增加，抑菌圈逐漸增大，表明其抗菌作用主要?dú)w因于ε-PL的含量。

（2）OD值計(jì)數(shù)法顯示，對(duì)比空白組，隨著孵育時(shí)間的延長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)組OD值逐漸下降，表明G-PAGL的持續(xù)抗菌性能。

（3）通過(guò)SEM觀察各組凝膠作用處理后的細(xì)菌圖可知，細(xì)菌接觸G-PAGL水凝膠后，表面粗糙，發(fā)生形變，表明細(xì)菌死亡。也證實(shí)了G-PAGL水凝膠是通過(guò)破壞細(xì)胞膜來(lái)殺滅細(xì)菌的。這一機(jī)理可以解釋為水凝膠的正電荷通過(guò)干擾表面ζ電位而破壞細(xì)菌膜。

表1 四種抗菌檢測(cè)手段的優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比

通過(guò)對(duì)以上四種常見(jiàn)水凝膠抗菌檢測(cè)手段及案例分析的學(xué)習(xí)，研究者可從多方面綜合分析課題設(shè)計(jì)中抗菌水凝膠的抑菌效果。其中，相較于其他檢測(cè)手段，涂布平板法中細(xì)菌活死雙染法可直接對(duì)抗菌凝膠作用后的細(xì)菌進(jìn)行著色觀察，得到數(shù)據(jù)圖更為直觀。研究者通常選擇SYTO 9/PI 活死細(xì)菌染料來(lái)鑒別細(xì)菌的生長(zhǎng)狀況。