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嘉峪檢測網 2015-10-02 10:10
據外媒9月5日報道，美國疾病控制與預防中心（CDC）發布的報告顯示，美國11個州近期暴發沙門氏菌感染，造成1人死亡300人住院，導致這次疾病暴發的元兇可能是人們喜愛的金槍魚壽司。專家指出，我國由沙門氏菌引起的食源性疾病居細菌性食源性疾病的首位。引起沙門氏菌中毒的食品種類多為動物性食品以及即食食品。
一、國內外關于沙門氏菌檢測的一些標準方法：
國家標準：GB
出入境行標：SN
國外標準：
FDA(Food & Drug Administration）
AOAC(Association of Official AnalyticalChemists)
FSIS(FOOD SAFETY AND INSPECTION SERVICE）
ISO（International Organization for Standardization）
加拿大官方食品微生物分析方法
二、檢測及鑒定
隨著生物實驗技術的發展，沙門氏菌的檢測和鑒定技術也在不斷的完善，大致可分為三大類：常規生化鑒定方法、免疫學方法以及分子生物學方法。
第三方實驗室沙門氏菌檢測和鑒定過程常用的儀器：VIDAS（梅里埃）BAX （杜邦）VITEK（梅里埃）
沙門氏菌典型菌落形態：
生化鑒定顯示：
API20E 生化鑒定是根據快速酶促反應及代謝產物的檢測技術發展的一種細菌編碼鑒定法，廣泛應用于臨床、食品中革蘭氏陰性桿菌的快速鑒定。
限值要求：
參考CAC、ICMSF、歐盟、澳大利亞和新西蘭、美國、加拿大、香港、臺灣等國際組織、國家和地區的即食食品中沙門氏菌限量標準及規定，《GB29921-2013食品中致病菌限量》按照二級采樣方案對所有11類食品設置沙門氏菌限量規定，具體為n=5，c=0，m=0（即在被檢的5份樣品中，不允許任一樣品檢出沙門氏菌）。
三、沙門氏菌傳統檢測方法的關鍵控制點
1、樣品處理
盡可能縮短解凍時間，使竟爭菌群生長最少，并減小對沙門氏菌的損傷
致病菌取樣一定要均勻并具有代表性（蛋黃蛋清混勻取樣）。
2、培養基及培養方面
（1）沒有一種培養基可疑準確無誤的篩選出沙門氏菌，必須選擇多種選擇性培養基同時篩選，只能說顯色培養基綜合選擇性更強。
（2）試劑和培養基的配置一定要嚴格按照說明書配置，是否需要高壓滅菌，添加劑用量及培養基保存條件。
（3）有1%沙門氏菌乳糖發酵陽性，為了避免漏檢乳糖陽性菌必須選擇不依賴乳糖的培養基，目前BS培養基認為是最適合的。
（4）BS培養基是分離沙門氏菌的高效培養基，特別適用于傷寒類的沙門氏菌，不是所有的選擇性培養基都能有效分離出傷寒沙門氏菌和副傷寒沙門氏菌，BS是分離傷寒類沙門氏菌的首選培養基。
（5）BS不能高壓，不能過熱溶解，只能在使用前一天配置，保存在陰暗處，48h后失去選擇性，保存不當，顏色變淺標明已經開始減效。
（6）HE不能高壓滅菌，煮沸不能超過1min，水域中冷卻，只能保存一天；XLD平板不能高壓，不能過熱煮沸，保存一天。
（7）TTB的添加劑必須在棕色瓶儲存，不能見光，否則選擇性減弱。TTB有碳酸鈣沉淀，分裝時一定要搖勻，碳酸鈣作用是消除和吸收有毒代謝產物。TTB加入添加劑后就不能再加熱。
（8)SC種含有亞硒酸氫鈉，劇毒物質，使用時候要注意安全，當天使用當天配置。
（9）TSI要制備成高柱斜面，有助于結果判讀
（10）TSI和賴氨酸脫羧酶可以篩選掉大部分非沙門氏菌
（11）典型沙門菌培養基，斜面顯紅色，底端顯黃色，有氣體產生，有９０％形成硫化氫，瓊脂變黑。當分離到乳糖陽性沙門菌時，三糖鐵斜面是黃色的，因而要確認沙門菌，不應僅僅限于三糖鐵培養的結果。
（12)標準要求的培養時間要按最長時間培養，否則會漏檢風險。
（13）從挑選可疑菌落開始，建議每步都同時劃線營養瓊脂瓊脂，確保每個菌落均為純菌。
3、生化反應
（1）生化反應要用純菌落進行（從營養瓊脂中挑取單個菌落制備成適宜濃度的菌懸液）。
（2）多種生化試驗同時測試可以提高檢測效率。
4、血清學鑒定
（1）血清學鑒定是沙門氏菌檢驗中的重要鑒定方法，包括菌體抗原（O）鑒定、鞭毛抗原（H）鑒定和Vi抗原鑒定。
（2）只需要鑒定某個菌株是否屬于沙門氏菌，那只需要做O多價和H多價血清就可以（大多數食源性沙門氏菌凝集A-F群O多價）
（3）判定時應該以生化試驗結果為主，在生化試驗的基礎上進行血清學判定，血清學的原理是抗原抗體結合，非沙門氏菌的微生物也有可能帶有沙門的類似抗原的。不可以不做生化只用血清初篩。
（4）血清檢測要使用24h內的純菌，在規定時間內觀察結果，并做自凝實驗。
（5）Ｏ血清不凝集時，將菌株接種在瓊脂量較高的（如２．５％～３％）培養基上再檢查；如果是由于Ｖｉ抗原的存在而阻止了Ｏ凝集反應時，可挑取菌苔于１ｍｌ生理鹽水中做成濃菌液，于酒精燈火焰上煮沸后再檢查。Ｈ抗原發育不良時，將菌株接在０．５５％～０．６５％半固體瓊脂平板的中央，俠菌落蔓延生長時，在其邊緣部分取菌檢查；或將菌株通過裝有０．３％～０．４％半固體瓊脂的小玻管１～２次，自遠端取菌培養后再檢查。
（6）凝集不好的放室溫（不要放冰箱）室溫放置1-2天或者傳代一次，可能凝集的要好些。
（7）如果實驗室條件許可建議購置進口血清，進口血清一般以泰國和丹麥血清為佳，國產和進口血清在判讀時會有差異。
（8）若實驗室只有國產血清，可以同時使用兩種廠家產品互相驗證。
四、實驗記錄及結果報告
1、檢測原始記錄要求
（1）樣品信息全面（特殊樣品狀態描述）
（2）檢測方法信息全面（涉及第幾法要標注）
（3）實驗環境溫濕度
（4）培養基培養溫度、時間、批號
（5）溯源性（能簡單還原測試過程）
（6）測試/審核人員簽字
2、結果報告
（1）報告陽性結果：檢出沙門氏菌/25g 或mL
（2）報告陰性結果：未檢出沙門氏菌/25g 或mL
（3）必要時將菌株送至專業檢驗檢疫部門做進一步的血清學鑒定
3、實驗室質量控制
（1）不同方法/儀器間比對
（2）過程中陽性/空白對照
（3）實驗室內部質量控制
（4）實驗室外部比對試驗
來源：良潤生物
