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嘉峪檢測網 2017-09-19 09:29
一、方法原理：
待測樣品
待測樣品中的苯甲酸、山梨酸和糖精鈉均是水溶性的，直接以水作為提取液；對于蛋白含量較高的樣品，如肉制品，需要使用蛋白沉淀劑進行除蛋白；對于脂肪含量較高的樣品，如固態調味料，需要采用有機溶劑將樣品中的脂肪除去。
通常采用亞鐵氰化鉀和乙酸鋅作為蛋白沉淀劑，正己烷作為除脂肪劑。提取中可采用渦旋或超聲提取。待測液經過高效液相色譜儀分離，經紫外檢測器或二極管陣列檢測器檢測，通過色譜峰的保留時間和掃描光譜圖進行定性，外標法進行定量。
二、試樣制備：
對于均勻樣品，如牛奶，可直接將多個預包裝樣品直接混合均勻；對于不均勻樣品，如水果罐頭，先采用粉碎機或組織勻漿機將其粉碎，再攪拌均勻，對于較為粘稠的樣品，如可可制品，可先將其加熱使其熔融，在熔融狀態下攪拌均勻。
三、試樣保存：
液體樣品于4 ℃下保存；其他樣品于-18 ℃下保存。
四、試樣提取：
1、非高蛋白高脂肪樣品：稱取混合均勻的樣品2-5 g（精確至0.001 g），加入20 mL水，渦旋混合30 s，超聲提取20 min，取出待冷卻至室溫定容至25 mL，搖勻，5000 r/min離心10 min，取上清液過0.22 μm濾膜待測。
2、高蛋白樣品：稱取混合均勻的樣品2-5 g（精確至0.001 g），加入15 mL水，渦旋混合30 s，超聲提取20 min，取出待冷卻至室溫加入亞鐵氰化鉀和乙酸鋅溶液各2 mL，渦旋混合， 5000 r/min離心10 min，將上清液轉移至另一容量瓶中，并用水定容至25 mL，搖勻并過0.22 μm濾膜待測。
3、高脂肪樣品：稱取混合均勻的樣品2-5 g（精確至0.001 g），加入5 mL正己烷，渦旋混合，5000 r/min離心10 min，除去正己烷相，并將樣品表面吸附的正己烷揮干，向樣品中加入15 mL水，渦旋混合30 s，超聲提取20 min，待冷卻至室溫，5000 r/min離心10 min，將上清液轉移至另一容量瓶中，并用水定容至25 mL，搖勻并過0.22 μm濾膜待測。
4、高蛋白高脂肪樣品：稱取混合均勻的樣品2-5 g（精確至0.001 g），加入5 mL正己烷，渦旋混合，5000 r/min離心10 min，除去正己烷相，并將樣品表面吸附的正己烷揮干，向樣品中加入15 mL水，渦旋混合30 s，超聲提取20 min，待冷卻至室溫，加入亞鐵氰化鉀和乙酸鋅溶液各2 mL，渦旋混合， 5000 r/min離心10 min，將上清液轉移至另一容量瓶中，并用水定容至25 mL，搖勻并過0.22 μm濾膜待測。
注意事項：
對于高蛋白高脂肪的樣品，檢驗檢測過程中需根據蛋白和脂肪的含量對蛋白沉淀劑和正己烷的加入量和除雜次數進行調整，如樣品含油較高，則可以通過少量多次加入正己烷進行除脂肪，已達到預期目的。
五、檢測
1、標準曲線的配制：精密移取適量的苯甲酸、山梨酸和糖精鈉標準溶液，用水稀釋，配制成線性范圍合適的標準曲線。
注意事項：
1）購買標準品時建議直接選擇液態的標準溶液，不建議購買固體標準物質，一是省去標準物質稱量帶來的誤差，同時避免標準溶液的濃度出現小數等后期數據處理帶來的不便，二是避免有些固態標準物質使用前需要烘干等前處理帶來的麻煩；
2）標準曲線的線性范圍建議根據待測樣品溶液中待測組分的含量而定，盡量使樣品溶液中待測組分的含量處于標準曲線的中間位置，以最大限度的降低標準曲線擬合引入的檢測結果的不確定度。
2、樣品溶液的檢測：按照同標準溶液檢測的相同儀器條件進行樣品溶液的檢測。
注意事項：
檢測器的選擇建議采用二極管陣列檢測器，因樣品中的苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的檢測波長為230 nm，處于紫外區，易出現干擾峰。
若采用二極管陣列檢測器進行檢測，同時可以對光譜進行掃描，首先根據保留時間定性后，再通過光譜圖進一步定性，以確保對應保留時間的色譜峰確實為待測組分峰，避免發出假陽性報告。
來源：食品580
