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嘉峪檢測(cè)網(wǎng) 2024-09-02 08:27
腫瘤是以細(xì)胞不可控的生長(zhǎng)和傳播為特點(diǎn)，并最終導(dǎo)致機(jī)體的死亡。腫瘤的發(fā)生既可以來(lái)自于外部因素如輻射、致癌化合物暴露、微生物感染或一些物理作用，也可以來(lái)自?xún)?nèi)部如基因突變、激素、免疫功能抑制等。藥物潛在致癌機(jī)制也是多種多樣，所以需要在上市前對(duì)致癌風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估，并根據(jù)情況完成相關(guān)研究。
先看下監(jiān)管機(jī)構(gòu)對(duì)藥物致癌性試驗(yàn)的要求。對(duì)于用藥周期達(dá)到3個(gè)月或更久的藥物，F(xiàn)DA要求在上市前提交致癌性研究資料。日本和歐洲則要求6個(gè)月及以上的藥物提供。后續(xù)ICH將這一藥物暴露周期也定在6個(gè)月。當(dāng)然，如果在短期暴露或非頻繁給藥情況下，出現(xiàn)了致癌方面的擔(dān)憂(yōu)，如遺傳毒性結(jié)果陽(yáng)性，構(gòu)效關(guān)系提示致癌風(fēng)險(xiǎn)，短期重復(fù)給藥試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)癌前病變或同類(lèi)產(chǎn)品已觀測(cè)到人類(lèi)致癌風(fēng)險(xiǎn)等，那就不能按照6個(gè)月這一條件決定致癌試驗(yàn)開(kāi)展與否了。
內(nèi)源性多肽、蛋白或其類(lèi)似物通常不需要開(kāi)展致癌性試驗(yàn)。但是，如果藥物與內(nèi)源性成分生物學(xué)作用迥異，或藥物經(jīng)過(guò)修飾導(dǎo)致結(jié)構(gòu)與內(nèi)源性成分完全不同，或藥物暴露量較內(nèi)源性成分高很多，則還是需要進(jìn)行致癌性評(píng)估。
并不是所有藥物均需要開(kāi)展2年大鼠致癌性研究。ICH S1認(rèn)為如果從藥物靶點(diǎn)、信號(hào)通路、毒理學(xué)研究等綜合分析，認(rèn)為藥物致癌風(fēng)險(xiǎn)很低，或者明確有致癌風(fēng)險(xiǎn)，則2年大鼠致癌試驗(yàn)開(kāi)展的意義并不大。證據(jù)權(quán)重分析（WoE）分析維度如下圖所示，從靶點(diǎn)生物學(xué)作用、次要藥效學(xué)、重復(fù)給藥毒性研究結(jié)果、對(duì)激素的影響、遺傳毒性和免疫調(diào)節(jié)作用，綜合評(píng)估可能的致癌風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于“likely”和“unlikely”兩種情況，額外開(kāi)展2年大鼠致癌研究并無(wú)意義。對(duì)于不確定的情況，則需要開(kāi)展大鼠2年致癌試驗(yàn)。
不過(guò)小鼠致癌試驗(yàn)往往通常還是要開(kāi)展的，即使WoE認(rèn)為藥物人體潛在致癌風(fēng)險(xiǎn)為“unlikely”。根據(jù)動(dòng)物“3R”原則，建議優(yōu)先選擇轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型。當(dāng)然，某些情況下，小鼠試驗(yàn)也可以不進(jìn)行，比如WoE提示藥物致癌風(fēng)險(xiǎn)低，且小鼠中達(dá)不到人體治療劑量下的暴露水平。又如WoE提示藥物很可能是人體致癌物，小鼠試驗(yàn)也不適合繼續(xù)開(kāi)展。
種屬選擇
致癌性試驗(yàn)常規(guī)使用的是兩種嚙齒類(lèi)動(dòng)物組合，小鼠和大鼠。小鼠最常用的種系是CD-1，其他品系如B6C3D1、CF-1、NMRI、C57B1、Balb/c則用的相對(duì)較少。大鼠最常用的是SD大鼠，某些企業(yè)喜歡用Hans Wistar、Fischer344（F344），Long Evans和CFE用的很少。那如果大鼠和小鼠都不合適呢，倉(cāng)鼠（hamster）作為替補(bǔ)隊(duì)員就上場(chǎng)了。都是嚙齒類(lèi)種屬，為啥要用兩種動(dòng)物進(jìn)行致癌評(píng)估呢？因?yàn)榛谶^(guò)往認(rèn)知，沒(méi)有任一種屬能夠充分預(yù)測(cè)人體致癌風(fēng)險(xiǎn)。如果兩種種屬均未發(fā)現(xiàn)致癌風(fēng)險(xiǎn)，結(jié)果的可靠性要強(qiáng)于單一種屬。關(guān)于兩個(gè)種屬之間致癌結(jié)果是否一致問(wèn)題，不同數(shù)據(jù)來(lái)源出入挺大的，Purchase、Haseman、Gold團(tuán)隊(duì)公布的這一數(shù)據(jù)分別是82%、73%、30-40%。無(wú)論如何，任一嚙齒類(lèi)種屬致癌性結(jié)果并不能用于預(yù)測(cè)另外一種嚙齒類(lèi)動(dòng)物，所以雙種屬致癌性試驗(yàn)組合還是會(huì)繼續(xù)延續(xù)。
種屬選擇的考量因素有很多，除了傳統(tǒng)的相關(guān)種屬判定，動(dòng)物自發(fā)腫瘤、生存期、充分的背景數(shù)據(jù)等也需要作為選擇標(biāo)準(zhǔn)。而且，不同嚙齒類(lèi)品系各種類(lèi)型的腫瘤發(fā)生率區(qū)別很大，以最常用的SD大鼠為例，老年雌性SD大鼠有很高的乳腺癌發(fā)病率，且很多動(dòng)物因?yàn)檫@個(gè)原因在致癌性試驗(yàn)中的第二年死亡。F344大鼠雖然乳腺癌發(fā)病率低很多，但睪丸腫瘤的發(fā)病率接近100%。自發(fā)性腫瘤會(huì)很大程度上影響致癌性結(jié)果的判定，首先如果受試物引發(fā)的某種腫瘤在該種屬中自發(fā)率很高，則會(huì)有很高的背景噪音，評(píng)價(jià)難度增加。其次，即使結(jié)果顯示較背景數(shù)據(jù)高很多，也可能是這個(gè)種屬對(duì)該腫瘤比較敏感，畢竟有很高的自發(fā)率，對(duì)于能否預(yù)測(cè)人體情況，也很難判定。除自發(fā)性腫瘤，動(dòng)物生存期也需重點(diǎn)考慮，正常需要考察藥物在其正常生命周期暴露后引發(fā)的潛在致癌風(fēng)險(xiǎn)。如果動(dòng)物在試驗(yàn)期間死亡，則不能提供足夠的腫瘤形成周期，整個(gè)試驗(yàn)的靈敏度也降低，假陰性的概率則會(huì)增加。另外，還需要積累充分的背景數(shù)據(jù)，輔助致癌結(jié)果的判定，比如CD-1小鼠脾臟、肝臟、腎臟、甲狀腺、腎上腺有比較高的淀粉樣變性自發(fā)病變。
動(dòng)物飼養(yǎng)
致癌試驗(yàn)以周期長(zhǎng)和花費(fèi)高著稱(chēng)。這期間動(dòng)物護(hù)理非常重要，也會(huì)極大影響試驗(yàn)質(zhì)量。各種物理、生物學(xué)因素引入的風(fēng)險(xiǎn)需要仔細(xì)評(píng)估。物理因素包括光、溫度、相對(duì)濕度、通風(fēng)、噪音、飲食、居住條件等，生物因素諸如細(xì)菌和病毒可能引起感染和其他疾病。例如光照持續(xù)時(shí)間、強(qiáng)度和光源質(zhì)量會(huì)影響動(dòng)物腫瘤發(fā)病率。光強(qiáng)過(guò)大會(huì)引起動(dòng)物眼部損傷。居住在高排和側(cè)面籠位的動(dòng)物受影響最大。室溫異常會(huì)使小鼠皮膚腫瘤發(fā)生率增加。相對(duì)濕度改變則會(huì)影響動(dòng)物飲水和攝食。低的濕度還會(huì)引發(fā)動(dòng)物“ringtail”（環(huán)尾）。嚙齒類(lèi)動(dòng)物致癌試驗(yàn)中的理想飲食要營(yíng)養(yǎng)充分，但又不能營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩。FDA研究發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)在大鼠的壽命在降低，與飲食有很大關(guān)系。
飼養(yǎng)籠的類(lèi)型和墊料也會(huì)影響小鼠皮膚腫瘤的發(fā)病率和發(fā)病周期。DePass團(tuán)隊(duì)1986年研究顯示，不銹鋼籠子和聚碳酸酯籠盒飼養(yǎng)的小鼠，后者腫瘤發(fā)生的更早，且發(fā)生率也更高。
給藥組數(shù)量
致癌試驗(yàn)通常設(shè)置對(duì)照組和3-4個(gè)劑量水平的給藥組。一是如果致癌陽(yáng)性，可以充分考察劑量-反應(yīng)關(guān)系。二是畢竟致癌試驗(yàn)周期太長(zhǎng)，風(fēng)險(xiǎn)也很高，如果最高劑量組動(dòng)物出現(xiàn)過(guò)量死亡，還有充分的劑量水平用于評(píng)估。
對(duì)照組數(shù)量
與其它毒理試驗(yàn)通常僅設(shè)置1組對(duì)照不同，致癌試驗(yàn)常用的是設(shè)置2個(gè)對(duì)照組，每組動(dòng)物數(shù)相同。當(dāng)然，也有設(shè)置1個(gè)對(duì)照組，動(dòng)物數(shù)量與給藥組一樣的設(shè)計(jì)。還有一種比較少用的設(shè)計(jì)，設(shè)置1個(gè)對(duì)照組，數(shù)量是給藥組的2倍。
使用兩組對(duì)照的優(yōu)勢(shì)是可以評(píng)估兩組之間的自發(fā)腫瘤的變異情況。假如兩組間無(wú)差異，數(shù)據(jù)可以合并使用，這種情況下兩個(gè)對(duì)照組和一個(gè)對(duì)照組的設(shè)計(jì)就沒(méi)有區(qū)別。假如兩組間有差異，則必須將給藥組的數(shù)據(jù)與兩個(gè)對(duì)照組分別進(jìn)行對(duì)比。那如果對(duì)比完發(fā)現(xiàn)，給藥組某個(gè)腫瘤發(fā)生率比其中一個(gè)對(duì)照組高，跟另外一個(gè)對(duì)照組相似怎么辦呢？這就需要結(jié)合歷史背景對(duì)照數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
劑量設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)
劑量設(shè)計(jì)本來(lái)就是毒理研究的重要考量點(diǎn)，對(duì)于致癌試驗(yàn)?zāi)蔷透侵刂兄亓恕．吘梗倍净蚨唐趧┝刻剿髟囼?yàn)劑量設(shè)計(jì)不合理還有后續(xù)重復(fù)給藥毒理試驗(yàn)補(bǔ)救，致癌試驗(yàn)就沒(méi)有這種機(jī)會(huì)了。尤其當(dāng)致癌試驗(yàn)后期才暴露這一問(wèn)題，就更討厭了。
大部分藥企劑量設(shè)計(jì)的原則是，高劑量為最大耐受劑量（MTD），低劑量是最大臨床推薦劑量（MRHD）的1-5倍，中劑量為兩個(gè)劑量之間的幾何平均值。ICH（1995）對(duì)MTD描述“that dose which is predicted to produce a minimum toxic effect over the course of the carcinogenicity study, usually predicted from the results of a 90-day study”。MTD如果設(shè)計(jì)合理，首先不會(huì)影響動(dòng)物的生存期，其次對(duì)動(dòng)物體重增長(zhǎng)有中等影響，并產(chǎn)生一定的毒性癥狀。對(duì)于沒(méi)有毒性的藥物，按照傳統(tǒng)MTD的高劑量設(shè)計(jì)思路，高劑量和低劑量可能會(huì)差好幾個(gè)數(shù)量級(jí)。有些指南不建議高低劑量相差超過(guò)10倍，這種情況下可以將高劑量定為MRHD的100倍。其實(shí)，按照低劑量是MRHD的1-5倍計(jì)，已經(jīng)有些超出10倍的要求了。對(duì)于摻食給藥的情況，日本監(jiān)管機(jī)構(gòu)規(guī)定，即使MTD還沒(méi)達(dá)到，高劑量組藥物在飲食中的比例不應(yīng)超過(guò)5%。
當(dāng)然，劑量選擇時(shí)還要考慮藥物藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)，不建議選擇的高劑量在排泄方式上與低劑量有很大不同。代謝角度的考量也是類(lèi)似的，不建議高劑量產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物與低劑量有很大不同。另外，如果藥物在某個(gè)劑量已經(jīng)達(dá)到最大暴露，也不建議繼續(xù)提高給藥劑量。
每組動(dòng)物數(shù)
建議每組每性別至少50只。大部分企業(yè)選擇這一最低數(shù)量，也有企業(yè)選擇80只/性別/組。決定動(dòng)物數(shù)量多少的核心要素是在試驗(yàn)終點(diǎn)時(shí)，保證有足夠數(shù)量的動(dòng)物用于致癌性評(píng)估。尤其是每天灌胃給藥的情況，有可能因?qū)κ彻茉斐傻膿p傷或藥物誤入氣管，引起動(dòng)物非正常死亡，更需要每組多設(shè)置一些動(dòng)物。還有些情況是致癌性試驗(yàn)和慢性毒性試驗(yàn)合并開(kāi)展，需要在第6和12個(gè)月時(shí)處死一些動(dòng)物，用于潛在的一般毒性評(píng)估，也需要每組的樣本量更大。
給藥途徑
最常見(jiàn)的兩種給藥途徑是摻食和灌胃。其它給藥途徑包括皮膚用藥、摻入飲水、注射給藥，視臨床擬用途徑而定。如果候選藥物臨床給藥途徑不只一種，通常建議摻食給藥。摻食的好處是節(jié)約人力，畢竟每天灌胃幾百上千只動(dòng)物是不小的工作量。另外，有研究顯示摻食不會(huì)像灌胃那樣，過(guò)高估計(jì)MTD。不過(guò)，如果藥物在嚙齒類(lèi)飲食中不穩(wěn)定或影響動(dòng)物正常攝食，就另當(dāng)別論了。摻食另外一個(gè)缺點(diǎn)是給藥劑量只能靠動(dòng)物體重和攝食數(shù)據(jù)計(jì)算，不像灌胃給藥劑量那么準(zhǔn)確。
試驗(yàn)周期
通常，大小鼠致癌性試驗(yàn)周期都是2年。偶爾也有大鼠周期延長(zhǎng)至30個(gè)月，小鼠周期縮短至18個(gè)月。出現(xiàn)這種區(qū)別的原因是過(guò)去認(rèn)為大鼠的壽命比小鼠更長(zhǎng)。不過(guò)，很多研究已經(jīng)證實(shí)SD大鼠和CD-1小鼠的生存期都是2年左右。其它品系，如F344大鼠和B6C3F1小鼠，也是一樣的2年壽命。
生存期
為確保能觀察到某些遲發(fā)腫瘤（比如某些弱致癌物），受試藥物需要盡可能久的暴露在動(dòng)物的生命周期中，這就需要?jiǎng)游镆畹淖銐蚓谩Ｈ绻麆?dòng)物在早期出現(xiàn)非腫瘤原因?qū)е碌乃劳觯瑫?huì)影響試驗(yàn)的質(zhì)量和試驗(yàn)?zāi)康牡倪_(dá)成。很多時(shí)候是致癌物的致癌潛力越弱，觀察到腫瘤發(fā)生的時(shí)間越晚。致癌物的劑量越低，觀察到腫瘤發(fā)生的時(shí)間同樣也晚。所以，動(dòng)物生存期是致癌性試驗(yàn)需要重點(diǎn)關(guān)注的。關(guān)于動(dòng)物最低生存期，沒(méi)有統(tǒng)一要求。FDA Redbook II Draft Guideline建議大鼠、小鼠或倉(cāng)鼠要給藥24個(gè)月。EEC guideline則認(rèn)為對(duì)照組存活率達(dá)到20%時(shí)，就可以結(jié)束試驗(yàn)。日本監(jiān)管機(jī)構(gòu)則認(rèn)為對(duì)照組或低劑量組存活率還剩25%時(shí)，就可以結(jié)束研究。
試驗(yàn)終點(diǎn)檢查
致癌試驗(yàn)的終點(diǎn)比慢性毒理試驗(yàn)更為聚焦，終點(diǎn)指標(biāo)更少。關(guān)鍵終點(diǎn)包括病理學(xué)、體重、生存期、臨床病理、攝食量。標(biāo)準(zhǔn)病理組織清單如下：
致癌數(shù)據(jù)的評(píng)估需要關(guān)注以下變化：1）劑量-反應(yīng)關(guān)系；2）腫瘤常見(jiàn)器官中的間變性腫瘤變化趨勢(shì)；3）腫瘤出現(xiàn)時(shí)間更早的趨勢(shì)；4）存在癌前病變的跡象。
致癌試驗(yàn)陽(yáng)性結(jié)果的判定通常有3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，分別是1）常見(jiàn)腫瘤出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的增加；2）腫瘤出現(xiàn)的時(shí)間明顯提前；3）雖然無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但出現(xiàn)非常罕見(jiàn)腫瘤，也判為陽(yáng)性。前兩個(gè)是基于統(tǒng)計(jì)學(xué)分析進(jìn)行判定。
最后再介紹下4款常見(jiàn)的轉(zhuǎn)基因小鼠。
致癌試驗(yàn)的常規(guī)組合是大鼠和小鼠2年給藥致癌研究。但這種動(dòng)物全生命周期給藥的方式也常常遭受質(zhì)疑。因此，1997年ICH提供了一種中期或短期小鼠試驗(yàn)，以替代小鼠2年全生命周期的研究。之后，F(xiàn)DA對(duì)于基于轉(zhuǎn)基因小鼠開(kāi)展中等周期致癌試驗(yàn)也逐漸接受。當(dāng)然，轉(zhuǎn)基因小鼠有充分的驗(yàn)證數(shù)據(jù)。目前驗(yàn)證最為充分，使用較多的是4種轉(zhuǎn)基因小鼠模型，分別是TSPp53+/-、Tg.AC、Hras2和XPA-/-。每種模型都有其獨(dú)特的特點(diǎn)。
Tg.AC小鼠模型
這是最早被開(kāi)發(fā)出來(lái)的轉(zhuǎn)基因致癌小鼠模型。早在1990年就被報(bào)道用于小鼠皮膚致癌性試驗(yàn)。這個(gè)小鼠體內(nèi)11號(hào)染色體上有4個(gè)拷貝的v-H-ras致癌基因，并與啟動(dòng)子ζ-globin基因進(jìn)行了融合。改造的基因與小鼠皮膚的快速成瘤有關(guān)。將一些潛在致癌物用于皮膚表面可以較短時(shí)間誘導(dǎo)出乳頭狀瘤。40%的乳頭狀瘤會(huì)進(jìn)一步發(fā)展為皮膚惡性腫瘤，主要是鱗狀細(xì)胞癌和肉瘤。
該模型在美國(guó)被美國(guó)環(huán)境健康科學(xué)研究所（NIEHS）和美國(guó)國(guó)家毒理學(xué)計(jì)劃（NTP）首次用于替代傳統(tǒng)致癌試驗(yàn)。這一試驗(yàn)中有40種化合物被用于致癌性測(cè)試，并最終發(fā)表，算是開(kāi)了短期試驗(yàn)替代傳統(tǒng)長(zhǎng)期致癌研究的先河。無(wú)論皮膚受試物還是需系統(tǒng)給藥的化合物，大多數(shù)使用Tg.AC小鼠模型開(kāi)展的致癌試驗(yàn)均采用皮膚給藥。這就要求對(duì)皮膚的處理要比較精細(xì)、小心，因?yàn)槠つw損傷也會(huì)形成乳頭狀瘤。
這個(gè)模型的問(wèn)題是，并不是所有擬系統(tǒng)給藥的藥物均適合經(jīng)皮途徑給藥。這也是為什么國(guó)際生命科學(xué)學(xué)會(huì)（ILSI）啟動(dòng)了一項(xiàng)在該模型中經(jīng)皮和系統(tǒng)雙給藥途徑研究計(jì)劃。另外，該模型還會(huì)發(fā)生對(duì)陽(yáng)性對(duì)照致癌物不響應(yīng)的情況，原因與ζ-globin啟動(dòng)子重排有關(guān)。不過(guò)，據(jù)稱(chēng)這一問(wèn)題已得到解決。
Tg.rasH2模型
該模型由日本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中央研究所（CIEA）研發(fā)，并于1990年首次對(duì)外披露信息。該模型小鼠的改造策略是將5或6個(gè)拷貝的人H-ras原癌基因以串聯(lián)的形式插入基因組。Tg.rasH2小鼠非常穩(wěn)定，自模型開(kāi)發(fā)成功以來(lái)，從未出現(xiàn)過(guò)響應(yīng)缺失的情況。該模型編碼的開(kāi)關(guān)蛋白與Tg.AC小鼠類(lèi)似，但不同的Tg.rasH2小鼠轉(zhuǎn)入的基因在所有器官和組織均表達(dá)，不僅限于皮膚。
采用N-甲基-N-亞硝脲（MNU）給予該小鼠，可快速誘導(dǎo)前胃乳頭狀瘤的出現(xiàn)。故，MNU后續(xù)常作為T(mén)g.rasH2小鼠致癌性研究的陽(yáng)性對(duì)照物。通常，采用Tg.rasH2小鼠開(kāi)展的致癌試驗(yàn)，6個(gè)月給藥周期就足夠了。因?yàn)檫@個(gè)節(jié)點(diǎn)動(dòng)物已經(jīng)出現(xiàn)各種自發(fā)性腫瘤，如脾臟血管肉瘤、前胃和皮膚乳頭狀瘤、肺腺癌和Harderian gland腺癌以及淋巴瘤。與其它致癌小鼠模型相比，這個(gè)模型特點(diǎn)是對(duì)致癌物的反應(yīng)非常強(qiáng)烈，直接表現(xiàn)是一旦接觸致癌物，陽(yáng)性反應(yīng)出現(xiàn)的更早、發(fā)生率也更高。具體機(jī)制尚不清楚。
雖然Tg.rasH2對(duì)少部分化合物給出的結(jié)果模棱兩可，但不可否認(rèn)的是，大多數(shù)非致癌物均能在該模型得到客觀、正確的鑒定。Tg.rasH2是目前轉(zhuǎn)基因致癌小鼠模型中最受歡迎的。
P53+/-小鼠模型
TSP P53+/-雜合子敲除小鼠模型由美國(guó)開(kāi)發(fā)。P53基因是最重要的腫瘤抑制因子之一，惡性腫瘤中經(jīng)常能看到該基因的突變。當(dāng)DNA鏈?zhǔn)軗p時(shí)，該因子會(huì)激活多個(gè)基因，這反過(guò)來(lái)會(huì)導(dǎo)致DNA修復(fù)時(shí)細(xì)胞周期的停滯，或者導(dǎo)致細(xì)胞凋亡（程序性細(xì)胞死亡），從而清除受損細(xì)胞。之所以使用雜合子，是因?yàn)榧兒献釉诔錾髱讉€(gè)月內(nèi)自發(fā)性腫瘤的發(fā)生率非常高。雜合子在長(zhǎng)達(dá)12個(gè)月內(nèi)的腫瘤背景發(fā)病率較低，但在這段時(shí)間內(nèi)，如果動(dòng)物給予致癌物，進(jìn)一步發(fā)生p53基因突變事件的可能性很高。從而導(dǎo)致抑癌功能的完全喪失，惡性腫瘤發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)升高。
最早是由美國(guó)NIEHS采用該模型進(jìn)行了致癌性研究，希望作為傳統(tǒng)致癌體系的備選之一。結(jié)果發(fā)現(xiàn)該模型對(duì)致突變致癌物苯和甲基苯胺是敏感的，6個(gè)月內(nèi)即出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果。但是，ILSI后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)，該模型6個(gè)月的給藥周期可能是不充分的。尤其是苯，6個(gè)月出現(xiàn)陰性或模棱兩可的結(jié)果，9個(gè)月才出現(xiàn)比較確定的陽(yáng)性結(jié)果。另外，非致突變致癌物和致突變非致癌物在該模型中均呈現(xiàn)陰性結(jié)果。
P53+/-小鼠是美國(guó)最為流行的轉(zhuǎn)基因致癌模型。
XPA-/-小鼠模型
XPA基因的兩個(gè)等位基因均通過(guò)ES細(xì)胞中的同源重組而失活，導(dǎo)致跨外顯子3和4的基因純合缺失。該基因編碼的蛋白可以通過(guò)NER通路，檢測(cè)并修復(fù)DNA損傷。XPA-/-小鼠模型僅殘留了2%-5%的NER活性。荷蘭國(guó)家公共衛(wèi)生及環(huán)境研究院（RIVM）1995年首次發(fā)表了該模型的數(shù)據(jù)。發(fā)現(xiàn)，XPA-/-小鼠暴露于IV-B放射或7,12-二甲基苯[α]蒽后可快速誘導(dǎo)皮膚腫瘤的發(fā)生。經(jīng)口給予其它致突變致癌物后，可以誘導(dǎo)多種體內(nèi)腫瘤的發(fā)生。早期研究認(rèn)為6個(gè)月足以觀察到腫瘤發(fā)生，后續(xù)更多試驗(yàn)表明9個(gè)月對(duì)某些陽(yáng)性藥物才更為充分如B[α]P, 2-AAF. XPA-/-小鼠對(duì)UV、基因毒性致癌物和非基因毒性致癌物都是敏感的。而且，非致癌物在該模型中未見(jiàn)假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)。
還有一種XPA-/-P53+/-雙轉(zhuǎn)基因小鼠，這個(gè)動(dòng)物對(duì)致癌物更為敏感。比如DES（己烯雌酚）開(kāi)展的一項(xiàng)研究中，XPA-/-P53+/-雙轉(zhuǎn)基因小鼠出現(xiàn)7個(gè)動(dòng)物轉(zhuǎn)移性骨肉瘤，XPA-/-小鼠僅1只。但這一模型有可能過(guò)于敏感，出現(xiàn)致癌陽(yáng)性結(jié)果與人體風(fēng)險(xiǎn)之間的相關(guān)性存疑。
ICH S1B(1997)已經(jīng)將以上模型寫(xiě)入了指導(dǎo)原則中，用于替代傳統(tǒng)長(zhǎng)期小鼠致癌試驗(yàn)。當(dāng)然，傳統(tǒng)大鼠致癌試驗(yàn)還是要開(kāi)展的。FDA對(duì)轉(zhuǎn)基因模型也是持開(kāi)放態(tài)度。甚至， FDA CBER對(duì)于遺傳毒性結(jié)果陰性，且從作用機(jī)制角度沒(méi)有太多擔(dān)憂(yōu)，單一種屬轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型，也有接受的案例。
來(lái)源：藥理毒理開(kāi)發(fā)
