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2015年4月22日，臺灣地區“衛生福利部”發布部授食字第1041900545號公告，制定“嬰兒谷物類輔助食品中黃曲毒素B1之檢驗方法（MOHWT0017.00）”，并自即日生效。同日，部授食字第1041900539號公告廢止“食品中黃曲毒素之檢驗方法－液狀乳中黃曲毒素M1及M2之檢驗”。

嬰兒谷物類輔助食品中黃曲毒素B1之檢驗方法

1 . 適用范圍：本檢驗方法適用于嬰兒谷物類輔助食品中黃曲毒素B1之檢驗。

2 . 檢驗方法：檢體經萃取及凈化后，以高效液相層析儀（high performance liquid chromatograph, HPLC）分析之方法。

2.1. 裝置：

2.1.1. 高效液相層析儀：

2.1.1.1. 檢出器：熒光檢出器（Fluorescence detector）。

2.1.1.2. 層析管：Cosmosil 5C18-AR，5 µm，內徑4.6 mm×25 cm，或同級品。

2.1.1.3. 光化學反應器：Knitted Reactor Coils (KRC) 25-25，或同級品。

2.1.2. 均質機（Homogenizer）：可達15000 rpm以上并適用有機溶劑者。

2.1.3. 粉碎機（Grinder）。

2.1.4. 氮氣蒸發裝置（Nitrogen evaporator）。

2.2. 試藥：氯化鈉采用試藥特級；甲醇采用液相層析級；去離子水（比電阻于25℃可達18 MΩ．cm以上）；黃曲毒素B1對照用標準品。

2.3. 器具及材料：

2.3.1. 離心管：50 mL，PP材質。

2.3.2. 容量瓶：1 mL及10 mL，褐色。

2.3.3. 濾膜：孔徑0.22 μm，Nylon材質。

2.3.4. 濾紙：Whatman No.1，直徑11 cm，或同級品。

2.3.5. 玻璃纖維濾紙（Glass microfibre filters）：直徑9 cm。

2.3.6. 塑料針筒：1 mL及10 mL。

2.3.7. 免疫親和性管柱（Immunoaffinity column）：采用內含對黃曲毒素B1、B2、G1及G2具專一性單株抗體之AflaTest-P管柱，或同級品。

2.3.8. 針筒過濾器（Syringe filter）：濾膜孔徑0.22 μm，PTFE材質。

2.4. 試劑之調制：

2.4.1. 50%甲醇溶液

      　　取甲醇與去離子水以50：50（v/v）之比例混勻。

2.4.2. 80%甲醇溶液

      　　取甲醇與去離子水以80：20（v/v）之比例混勻。

2.5. 移動相溶液之調制：

    　　取甲醇與去離子水以45：55（v/v）之比例混勻后，經濾膜過濾，取濾液供作移動相溶液。

2.6. 標準溶液之配制：

     　　精確量取黃曲毒素B1對照用標準品約1 mg，精確稱定，以甲醇稀釋并定容至10 mL，作為標準原液。臨用時取適量標準原液，以50%甲醇溶液稀釋至0.05～25 ng/mL，供作標準溶液。

2.7. 檢液之調制：

      　　將檢體磨碎混勻后，取約25 g，精確稱定，置于均質機中，加入氯化鈉5 g及80%甲醇溶液125 mL，以15000 rpm均質2分鐘，經濾紙過濾。精確量取濾液10 mL，加去離子水40 mL混勻，以玻璃纖維濾紙過濾。精確量取濾液25 mL，注入免疫親和管柱（流速控制1滴／秒），待濾液完全通過管柱后，以去離子水10 mL流洗2次（流速控制1滴／秒），棄流出液，再以甲醇1 mL沖提（流速控制1滴／秒），收集沖提液，于40℃水浴中以氮氣濃縮至干，再以50%甲醇溶液定容至1 mL，經針筒過濾器過濾，供作檢液。

2.8. 鑒別試驗及含量測定：

     　　精確量取檢液及標準溶液各50 μL，分別注入高效液相層析儀中，依下列條件進行液相層析，就檢液與標準溶液所得波峰之滯留時間比較鑒別之，并依下列計算式求出檢體中黃曲毒素B1之含量（ppb）：

    　　　　檢體中黃曲毒素B1含量（ppb）=

    　　C：由標準曲線求得檢液中黃曲毒素B1之濃度（ng/mL）

    　　V：檢體最后定容之體積（mL）

    　　F：稀釋倍數（25）

    　　M：取樣分析檢體之重量（g）

    　　高效液相層析測定條件：

    　　　　層析管柱：Cosmosil 5C18-AR，5 µm，內徑4.6 mm×25 cm。

    　　　　光化學反應器：KRC 25-25。

    　　　　熒光檢出器：激發波長360 nm，發射波長440 nm。

    　　　　移動相溶液：依2.5.節所調制之溶液。

    　　　　移動相流速：1.0 mL/min。

附注：1.   本檢驗方法之定量極限為0.05 ppb。

　　　2.   檢體中有影響檢驗結果之物質時，應自行探討。

　　　3.   以液相層析串聯質譜儀（LC/MS/MS）進行確認時，其LC/MS/MS之多重反應偵測（multiple reaction monitoring, MRM）模式參考參數如下表

分析物

離子化模式

離子對

去集簇電壓

（V）

碰撞能量

（eV）

前驅離子（m/z）＞

產物離子（m/z）

黃曲毒素B1

ESI+

313＞241*

313＞285

48

48

36

22

　　　　*定量離子對

　　　　注：上述參數不適時，依所使用之儀器，設定適合之參數。

參考文獻：

AOAC. 2004. Aflatoxin B1 in baby foods. AOAC Official Method 2000. 16.

廈門WTO工作站編

2015.4.23