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嘉峪檢測網 2025-03-19 08:29
1. 背景介紹
什么是干燥？
干燥是指去除植物組織中的水分并且保存植物組織的正常形態不受損傷，如皺縮、破損、變形等的過程。
為什么要干燥？
1、植物組織含水量較大，若直接放入掃描電鏡真空倉中觀察，其形態會因真空而形變塌陷；
2、植物組織中的水分會污染掃描電鏡的物鏡、燈絲等元件；
3、水分的存在會影響掃描電鏡的成像效果，降低分辨率；
4、水分的存在會造成離子濺射過程中的放電現象，從而干擾鍍膜及組織形態的干燥。
利用掃描電子顯微鏡觀測植物組織表面形貌時，需要先對植物組織進行干燥處理，去除其內部水分。常用的干燥方法有自然干燥法、烘箱干燥法、乙醇干燥法、叔丁醇干燥法和臨界點干燥法。
其中對于大多數組織而言，叔丁醇干燥法和臨界點干燥法在保存組織形態的真實完整性方面較其他方法存在明顯優勢。
但因臨界點干燥法需要特殊的臨界點干燥儀才能進行，而叔丁醇干燥法只需要真空泵即可完成干燥，操作簡便快捷，適用于常規實驗操作。接下來，介紹叔丁醇干燥法的實驗原理、實驗步驟和注意事項。
2. 實驗原理
叔丁醇，化學式C4H10O，無色油狀液體，凝固點23.5℃，低真空環境下即可升華，用叔丁醇作為介質干燥植物組織，可以避免氣液界面對樣品的損傷，從而保存組織的生活狀態。
3. 實驗步驟
1、根據實驗目的選取特定部位的植物組織于裝有3%戊二醛固定液的離心管中固定24h，組織大小為3mm3；
2、使用0.1mol PBS（pH7.4）的緩沖液清洗組織3次，每次10min，洗去多余的戊二醛固定液；
3、梯度叔丁醇脫水，其中30%、50%、70%、90%叔丁醇各脫水一次，每次15min；100%叔丁醇脫水三次，每次15min；
4、吸棄離心管中的叔丁醇，再重新加入少量的叔丁醇（沒過組織即可），放入4℃冰箱中30min至叔丁醇凝固成固體。
5、取出離心管放入真空干燥皿中，打開真空泵抽真空至0.08MPa以上，2h左右叔丁醇即可升華完畢，留下干燥的組織。
6、取出組織，粘在粘有導電膠的樣品臺上，放入離子濺射儀中鍍膜后即可放入掃描電子顯微鏡中進行觀察。
4. 注意事項
1、植物組織取材之前，若表面雜質較多，需用去離子水或者緩沖液輕柔的清洗組織表面；
2、組織塊的大小要控制在3mm3左右，如果無法減小組織塊的體積，脫水時間要根據組織大小有所增加；
3、更換梯度叔丁醇時，盡可能的吸棄離心管中的叔丁醇，但要保證組織不暴露在空氣中；
4、純叔丁醇脫水要徹底，水分的存在使叔丁醇在4℃條件下無法凝固。
來源：實驗老司機
