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嘉峪檢測網 2025-03-18 20:56
一、實驗室菌株保存的核心目標
長期存活：維持菌種代謝停滯，減少遺傳變異；
防止污染：杜絕雜菌入侵；
便捷取用：快速復活且性狀穩定。
二、5大常見保存方法詳解與對比
1. 斜面低溫保存法
原理：利用低溫（4℃）減緩代謝，固體培養基短期維持菌種活性。
操作步驟：接種至斜面培養基→培養至菌苔豐滿→封口膜密封→4℃保存。
保存時間：1-3個月（細菌）、3-6個月（真菌）。
優點：成本低、操作簡單、無需特殊設備。
缺點：易污染、保存期短、頻繁傳代易變異。
適用場景：短期實驗或菌種日常使用。
2. 液體石蠟覆蓋法
原理：石蠟隔絕氧氣，抑制代謝并防止培養基干燥。
操作步驟：斜面培養菌種→無菌石蠟覆蓋斜面→直立放置→4℃保存。
保存時間：6-12個月。
優點：延長斜面保存期，適合不產孢子的微生物。
缺點：取菌時易污染，石蠟易燃需謹慎操作。
適用場景：放線菌、酵母等非嚴格厭氧菌的中期保存。
3. 甘油管冷凍保存法
原理：甘油作為冷凍保護劑，-80℃超低溫抑制細胞損傷。
操作步驟：菌液與40%甘油等體積混合→分裝至凍存管→-80℃保存。
保存時間：1-2年（細菌）、5年以上（部分真菌）。
優點：復活率高（>90%）、操作標準化、適合高通量保存。
缺點：依賴-80℃冰箱，斷電風險需備份。
適用場景：大腸桿菌、酵母等常用模式菌的長期保存。
4. 冷凍干燥（凍干）保存法
原理：真空條件下升華脫水，使微生物進入休眠狀態。
操作步驟：菌液與保護劑（如脫脂奶）混合→預凍→真空干燥→封口。
保存時間：5-10年甚至更久。
優點：保存期極長、穩定性高、便于運輸。
缺點：設備昂貴（凍干機）、操作復雜、部分菌種存活率低。
適用場景：專利菌株、標準菌種庫的永久保存。
5. 液氮超低溫保存法
原理：-196℃液氮徹底終止代謝，細胞進入“假死”狀態。
操作步驟：菌液與冷凍保護劑（如DMSO）混合→程序降溫→投入液氮罐。
保存時間：10年以上。
優點：保存期最長、遺傳穩定性最佳。
缺點：液氮補充成本高、操作危險（凍傷、爆炸風險）。
適用場景：珍稀菌種、細胞系或遺傳工程菌的終極保存。
三、5大方法綜合對比表
四、如何選擇最佳保存方案？
1. 根據保存目的
日常使用：斜面低溫+甘油管備份；
長期保種：凍干+液氮雙保險；
菌種交換：凍干粉（無需冷鏈運輸）。
2. 根據實驗室條件
預算有限：優先甘油管法（-80℃冰箱普及率高）；
無超低溫設備：液體石蠟覆蓋法延長斜面保存期。
3. 菌種特性適配
產孢子菌（如芽孢桿菌）：凍干保存效果極佳；
厭氧菌：避免液體石蠟法（氧氣殘留），改用甘油管+厭氧袋。
五、菌株保存的常見翻車現場與應對
污染：保存前嚴格純化，添加抗生素（如放線菌酮抑制真菌）。
失活：優化保護劑（如海藻糖提升凍存存活率）。
標簽脫落：使用耐低溫油性筆，電子數據庫備份信息。
六、更智能的保存技術.
磁珠保存法：菌液吸附于磁珠，-80℃保存，取用便捷；
菌種DNA庫：保存基因組DNA+復蘇時人工合成（適用于極端難培養菌）。
來源：Internet
