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遺傳毒性測(cè)試，主要用于評(píng)估潛在的基因突變、染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)量變異、以及由醫(yī)療器械、材料或其浸提物引起的基因毒性。一般而言，遺傳毒性測(cè)試主要檢測(cè)兩類基因損傷：1)基因突變（點(diǎn)突變）；2）染色體損傷（即結(jié)構(gòu)畸變，如染色體易位、缺失和插入，以及染色體數(shù)量變化）。

首先要明確的是，不可能通過(guò)單一測(cè)試就能夠檢測(cè)出所有相關(guān)的毒性物質(zhì)，所以常用的方法是進(jìn)行一組體外測(cè)試或特定情境下的體內(nèi)測(cè)試。

其中，細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)結(jié)果表明，可以檢測(cè)在嚙齒類動(dòng)物試驗(yàn)中出現(xiàn)的由大多數(shù)遺傳毒性致癌物導(dǎo)致的遺傳突變。但是，由于測(cè)試材料在細(xì)菌系統(tǒng)中產(chǎn)生的DNA損傷，可能與其在真核細(xì)胞中的影響不同，所以還要在哺乳動(dòng)物細(xì)胞系中進(jìn)行測(cè)試。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞系常用于：1）檢測(cè)染色體總損傷（例如，染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)量畸變的體外試驗(yàn)）；2）檢測(cè)基因突變（例如，次黃嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶(HPRT)突變?cè)囼?yàn)）；3）檢測(cè)基因突變和染色體斷裂（例如，小鼠淋巴瘤胸苷激酶檢測(cè)，菌落數(shù)和大小測(cè)定）。

在選擇樣品制備方法時(shí)，要結(jié)合考慮材料或產(chǎn)品的化學(xué)組成和物理化學(xué)性質(zhì)，通常可以參考附錄A的圖A.1。該圖明確了用于選擇產(chǎn)品或材料提取方法（方法A、B或C）的決策過(guò)程。

除非樣品可以溶解在與測(cè)試系統(tǒng)相容的溶劑中，否則應(yīng)基于穩(wěn)定性，選擇能夠最大化提高醫(yī)療器械或材料的基因毒性殘留物濃度，但又不會(huì)發(fā)生降解且不會(huì)與樣品發(fā)生反應(yīng)的浸提液，同時(shí)能保證足夠的陽(yáng)性反應(yīng)。而且，通常會(huì)選擇兩種浸提液來(lái)進(jìn)行測(cè)試（可參見(jiàn)“ISO 10993-12:2012樣品制備及參考品解讀”或本標(biāo)準(zhǔn)附錄A）。另外，要根據(jù)與遺傳毒性測(cè)試系統(tǒng)的兼容性，選擇測(cè)試系統(tǒng)載體。試驗(yàn)應(yīng)在溶液、懸浮液、或成品（包括來(lái)源于成品的組分或材料）提取液中進(jìn)行。

開(kāi)展遺傳毒性測(cè)試時(shí)，測(cè)試組應(yīng)包括：1）細(xì)菌（OECD471）基因突變測(cè)試，可用于醫(yī)療器械浸提物測(cè)試；2）使用哺乳細(xì)胞（OECD473）評(píng)估染色體損傷的細(xì)胞遺傳學(xué)體外試驗(yàn)；3）體外小鼠淋巴瘤tk測(cè)定（OECD 476），同時(shí)包括檢測(cè)菌落生長(zhǎng)；4）用于評(píng)估染色體損傷和數(shù)量畸變的體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)（OECD 487）。 

如果存在影響化合物基因毒性活性的其他相關(guān)因素（例如，遺傳毒性機(jī)制和代謝動(dòng)力學(xué)）時(shí)，則需考慮體內(nèi)試驗(yàn)。其中，嚙齒類動(dòng)物造血細(xì)胞染色體損傷的體內(nèi)試驗(yàn)，可用于骨髓細(xì)胞染色體畸變的中間分析，或骨髓和外周血紅細(xì)胞的微核分析。

對(duì)于嚙齒類動(dòng)物造血細(xì)胞染色體損傷的體內(nèi)試驗(yàn)，應(yīng)使用兩種浸提液進(jìn)行檢測(cè)。若為極性浸提液，則優(yōu)選靜脈注射；若為非極性浸提液，則優(yōu)選腹膜內(nèi)注射。

如果兩組體外測(cè)試的結(jié)果都為陰性，則無(wú)需進(jìn)一步開(kāi)展體內(nèi)遺傳毒性測(cè)試。如果存在陽(yáng)性結(jié)果，則要進(jìn)行后續(xù)評(píng)估。評(píng)估過(guò)程總共分為6步（參見(jiàn)附錄B.1流程圖）：

• 第一步：識(shí)別初始遺傳毒性測(cè)試結(jié)果中的影響因素

a）識(shí)別交互因素（例如，非生理?xiàng)l件、測(cè)試品與培養(yǎng)基的相互作用、自氧化和細(xì)胞毒性）；b）識(shí)別代謝影響（例如，外源性代謝系統(tǒng)的性質(zhì)、代謝特征、特別的代謝產(chǎn)物）；c）通過(guò)化學(xué)表征鑒定雜質(zhì)（例如，材料成分研究或分析測(cè)試）。

• 第二步：評(píng)估作用機(jī)制和方式（MOA）及證據(jù)權(quán)重（WOE）

a）直接作用DNA與非直接作用DNA的模式比較；b）非整倍性和多倍性問(wèn)題，是否涉及非整倍體機(jī)制（染色體數(shù)量畸變）。

• 第三步：決策點(diǎn)

確定醫(yī)療器械或材料浸提物是否為基因毒素，如果，a）在毒理學(xué)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估框架內(nèi)，結(jié)果解釋和WOE / MOA分析顯示，在預(yù)期使用情況下，患者的關(guān)注度低或可忽略不計(jì)；或b）在毒理學(xué)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估框架內(nèi)，結(jié)果解釋和WOE / MOA分析表明，在預(yù)期使用情況下，患者可能存在潛在風(fēng)險(xiǎn)。如果確定是a），則不需要進(jìn)一步測(cè)試或評(píng)估。如果決定是b），則繼續(xù)步驟4。

• 第四步：執(zhí)行風(fēng)險(xiǎn)管理

應(yīng)對(duì)具有遺傳毒性危害進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)管理，或者選擇適當(dāng)?shù)捏w外和或體內(nèi)隨訪測(cè)試。

• 第五步：選擇并開(kāi)展另外的體外和或體內(nèi)測(cè)試

任何體內(nèi)試驗(yàn)，應(yīng)基于體外試驗(yàn)結(jié)果，選擇最合適的實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)。常用的體內(nèi)試驗(yàn)包括：1）嚙齒類動(dòng)物的微核試驗(yàn)（OECD 474）；2）嚙齒類動(dòng)物骨髓的中期分析（OECD 475）；3）轉(zhuǎn)基因致突變性試驗(yàn)（OECD 488）。

測(cè)試過(guò)程中，應(yīng)證明測(cè)試物已到達(dá)靶器官。對(duì)于嚙齒類動(dòng)物的微核試驗(yàn)或骨髓中期分析，生物利用度可以通過(guò)以下方法來(lái)證明：1）血液或血清中特定提取物化合物的定量分析；2）測(cè)試提取物對(duì)骨髓細(xì)胞的細(xì)胞毒性；3）靜脈內(nèi)暴露途徑（對(duì)于急性浸提液）。如果不能證明靶器官暴露，則應(yīng)在另一個(gè)靶器官中進(jìn)行第二次體內(nèi)試驗(yàn)，以驗(yàn)證缺乏體內(nèi)遺傳毒性。

• 第六步：重新解釋所有數(shù)據(jù)并確定測(cè)試物是否具有遺傳毒性

在某些情況下，體外試驗(yàn)的陽(yáng)性結(jié)果不具備相關(guān)性。所以，在確定體外結(jié)果的總體相關(guān)性時(shí)，應(yīng)考慮是否存在以下情況：1）最初的兩次體外試驗(yàn)，僅有一次為陽(yáng)性結(jié)果；2）使用類似機(jī)制終點(diǎn)做進(jìn)一步體外研究，未證實(shí)陽(yáng)性結(jié)果；3）體外陽(yáng)性結(jié)果與體內(nèi)情況無(wú)關(guān)；4）體內(nèi)測(cè)試中已證實(shí)測(cè)試樣品到達(dá)靶器官，但仍沒(méi)有表現(xiàn)出遺傳毒性。

ISO 10993-3:2014通讀下來(lái)，關(guān)于如何開(kāi)展遺傳毒性測(cè)試，小編認(rèn)為大體可分為三步：1）樣品制備：根據(jù)樣品理化性質(zhì)選擇合適的處理方法；2）體外測(cè)試：選用合適的細(xì)胞系開(kāi)展基因突變、染色體突變等測(cè)試；3）體內(nèi)測(cè)試：根據(jù)體內(nèi)測(cè)試結(jié)果選定合適的試驗(yàn)終點(diǎn)，按照“六步法”持續(xù)評(píng)估遺傳毒性水平。全文至此，小編希望能給大家?guī)?lái)一些思考和收獲。