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嘉峪檢測網(wǎng) 2021-03-31 12:09
pH值是培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項目，微生物的生長不僅依賴豐富的營養(yǎng)，還需要在適宜的pH值范圍內(nèi)才能正常生長繁殖或體現(xiàn)其生物特性，因此培養(yǎng)基pH值是否符合要求直接影響微生物檢驗結(jié)果。
01 培養(yǎng)基的配制
配料—溶解—調(diào)PH—過濾—分裝—包扎—滅菌—擺斜面—貯存
1.配料
配方換算→在容器中加入少量水（蒸餾水，自然水）→按照配方稱取各種藥品（依次加入）→加足所需水量（一藥一勺，取藥后立即蓋上瓶蓋）。
2.溶解
淀粉溶解：少量冷水調(diào)成糊狀
加熱溶解，特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度95-97℃ ，且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。
3.調(diào)PH
用1N的鹽酸或1N的 NaOH把培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到所要求的值。
4.過濾
濾紙或棉花進行過濾。（有時可以省去）
5.分裝
一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。
(1)三角瓶
若作靜置培養(yǎng)，則100ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶，最多不能超過150ml培養(yǎng)基/250ml的
三角瓶，否則滅菌時培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞，造成染菌；若作搖瓶培養(yǎng)，則15-20ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶，保證通氣良好。
(2)試管分裝
液體培養(yǎng)基一般裝4-5ml，約試管的1/4高度；
固體斜面培養(yǎng)基一般裝3-4ml，約試管的1/5高度。
6.包扎
分裝好后，塞上棉塞，在用牛皮紙將棉塞包裹好，防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。
7.滅菌
按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高，營養(yǎng)成分會被破壞，培養(yǎng)
基中的糖、氨基酸會使培養(yǎng)基的顏色變深。
8.擺斜面
滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放，使其凝固成為一個斜面，約占試管長度的1/2。
9.貯存
培養(yǎng)基在30℃下放置一天，無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用
注意事項：
在配制時，首先要確保培養(yǎng)基未結(jié)塊、顏色未發(fā)生變化或其他物理性狀明顯改變；應按照使用說明上的要求操作，稱量應達到相應的精確度；純化水是配制培養(yǎng)基最常用的溶劑，應確保溶劑的質(zhì)量符合要求；配制培養(yǎng)基應采用干凈且不會對培養(yǎng)基理化特性產(chǎn)生改變的容器。
在分裝前，應確保培養(yǎng)基完全溶解混勻，加熱助溶是最常用的方法，應注意不要過度加熱，尤其是含糖量較高的培養(yǎng)基，糖類不耐熱的特性會使糖類在高溫條件下產(chǎn)生有機酸而使pH值下降。
02 培養(yǎng)基的pH控制
培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內(nèi)，以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。
雖然培養(yǎng)基中含有緩沖物質(zhì)成分，能使培養(yǎng)基的pH盡可能的保持在要求的范圍內(nèi)，但是配出的培養(yǎng)基若不符合要求，就要進行必要的調(diào)整。如果有已校準pH計，可用pH計，如果沒有，可用精密的pH試紙，再根據(jù)需要用1 mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸（微調(diào)可用0.1氫氧化鈉或0.1mol/L鹽酸）調(diào)制所需的pH。培基的pH一般為7.4～7.6，也有酸性或堿性的。用氫氧化鈉調(diào)整的需要高壓滅菌的培養(yǎng)基，在調(diào)整pH時要調(diào)至高出所需0.1個～0.2個單位，因用氫氧化鈉調(diào)整時，高壓滅菌后，培養(yǎng)基的pH要降低0.1~0.2。如培養(yǎng)基中含有碳酸鈣成分，可不pH。
03 pH電極的維護保養(yǎng)
目前，實驗室使用pH計電極大部分都是復合電極。其優(yōu)點是使用方便，不受氧化-還原物質(zhì)的影響，且平衡速度快。使用時應注意以下事項：
⒈復合電極不用時，可充分浸泡飽和氯化鉀溶液中。切忌用洗滌液或其他吸水性試劑浸洗。
⒉使用前，檢查玻璃電極前端的球泡。正常情況下，電極應該透明而無裂紋；球泡內(nèi)要充滿溶液，不能有氣泡存在。
⒊測量濃度較大的溶液時，盡量縮短測量時間，用后仔細清洗，防止被測液粘附在電極上而污染電極。
⒋清洗電極后，不要用濾紙擦拭玻璃膜，而應用濾紙吸干, 避免損壞玻璃薄膜、防止交叉污染，影響測量精度。
⒌測量中注意電極的銀—氯化銀內(nèi)參比電極應浸入到球泡內(nèi)氯化物緩沖溶液中，避免電計顯示部分出現(xiàn)數(shù)字亂跳現(xiàn)象。使用時，注意將電極輕輕甩幾下。
⒍電極不能用于強酸、強堿或其他腐蝕性溶液。
⒎嚴禁在脫水性介質(zhì)如無水乙醇、重鉻酸鉀等中使用。
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