天堂网www,免费追剧大全在线观看电视剧,97久久精品无码一区二区欧美人 ,日本丰满少妇高潮呻吟

一、等電點(diǎn)沉淀法

等電點(diǎn)沉淀的原理:兩性電解質(zhì)在溶液pH處于等電點(diǎn)(pl) 時，分子表面靜電荷為零，導(dǎo)致賴以穩(wěn)定的雙電層及水化膜的削弱或破壞，分子間引力增加，溶解度降低，從而相互聚集，沉淀析出。利用等電點(diǎn)除雜蛋白時必須了解制備物對酸堿的穩(wěn)定性，不然盲目使用十分危險。不少蛋白質(zhì)與金屬離子結(jié)合后，等電點(diǎn)會發(fā)生偏移，故溶液中含有金屬離子時，必須注意調(diào)整pH。等電點(diǎn)法常與鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法或其他沉淀方法聯(lián)合使用，以提高其沉淀能力。

表3-2列舉了幾種酶和蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。

二、親和沉淀法

將親和試劑加人到含有靶蛋白的混合溶液中，就可以形成親和配體-靶蛋白的共聚物。這種共聚物可以在一定條件下形成沉淀，通過過濾或離心的方式進(jìn)行分離，然后將酶或蛋白質(zhì)從親和配體-聚合物上解離下來。這一過程類似于蛋白質(zhì)的親和層析,因此將這種分離提純蛋白質(zhì)的技術(shù)稱為親和沉淀。以脫乙酰幾丁質(zhì)作為例，可以說明親和沉淀法分離蛋白質(zhì)的基本原理與過程(圖3-5)。

這種利用親和沉淀分離蛋白質(zhì)的方法同傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)分離技術(shù)相比，可以顯示出親和沉淀的優(yōu)越性:

①它可以直接處理包含有細(xì)胞壁碎片的黏滯溶液，加入親和性聚合物形成可溶性親和配體復(fù)合物后,通過離心除去顆粒性物質(zhì),然后改變一定條件， 使聚合物-靶蛋白共聚物發(fā)生沉淀。

②親和沉淀在分離靶蛋白的同時，可以將之濃縮成較小體積，減少了后續(xù)分離的工作量，節(jié)約了化學(xué)試劑，因而更經(jīng)濟(jì)有效。

③可進(jìn)行多級親和沉淀，如果樣品液中還包含.

其他有用的物質(zhì)，可以使用另--種親和沉淀劑或改變純化策略加以分離提取。