1、測試方法
本測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈室(區(qū))的潔凈度。
儀器
1.培養(yǎng)皿：一般采用φ90 mmX15 mm規(guī)格的培養(yǎng)皿。
2.培養(yǎng)基：大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基(TSA)或沙氏培養(yǎng)基(SDA)或用戶認可并經(jīng)驗證了的培養(yǎng)基。
3.恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對恒溫培養(yǎng)箱進行校驗。
4.高壓蒸汽滅菌器。
測試步驟
1.測試前培養(yǎng)皿表面必須嚴格消毒。
2.將已制備好的培養(yǎng)皿按采樣點布置圖逐個放置，然后從里到外逐個打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露在空氣中。
3.靜態(tài)測試時，培養(yǎng)皿暴露時間為30min以上；動態(tài)測試時，培養(yǎng)皿暴露時間為不大于4h。
4.全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
5.采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基(TSA)配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在30℃~35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于2d；采用沙氏培養(yǎng)基(SDA)配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在20℃~25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于5d。
6.每批培養(yǎng)基應有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染。可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。
菌落計數(shù)
1.用肉眼對培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計數(shù)、標記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用5~10倍放大鏡檢查，有否遺漏。
2.若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。
注意事項
1.測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。
2.采取一切措施防止人為對樣本的污染。
3.對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄。
4.由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落,并須注意細菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。
5.采樣前應仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應剔除。
2、 測試規(guī)則
測試條件
在測試之前,要對潔凈室(區(qū))相關參數(shù)進行預先測試，這類測試將會提供測試沉降菌的環(huán)境條件，例如：這種預先測試或可包括：
a)溫度和相對濕度的測試。潔凈室(區(qū))的溫度和相對濕度應與其生產(chǎn)及工藝要求相適應(無特殊要求時，溫度在18℃~26℃，相對濕度在45%~65%為宜)，同時應滿足測試儀器的使用范圍；
b)室內(nèi)送風量或風速的測試，或壓差的測試；
c)高效過濾器的泄漏測試。
測試狀態(tài)
靜態(tài)和動態(tài)兩種狀態(tài)均可進行測試。
靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2人。
沉降菌測試前，被測潔凈室(區(qū))由使用者決定是否需要預先消毒。
測試報告中應標明測試時所采用的狀態(tài)和室內(nèi)測試人員數(shù)。
測試時間
1.在空態(tài)或靜態(tài)a測試時，對單向流潔凈室(區(qū))而言，測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于10min后開始。對非單向流潔凈室(區(qū))，測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于30 min 后開始。在靜態(tài)b測試時，對單向流潔凈室(區(qū))，測試宜在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過10min自凈后開始；對非單向流潔凈室(區(qū))，測試宜在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20min自凈后開始。
2.在動態(tài)測試時，則須記錄生產(chǎn)開始的時間以及測試時間。
沉降菌菌落數(shù)計算
1.采樣點數(shù)量及其布置
（1）最少采樣點數(shù)目
沉降菌測試的最少采樣點數(shù)目可參照GB/T 16292--2010。
（2）采樣點的位置
沉降菌的采樣點位置可參照GB/T 16292-2010。
a.工作區(qū)采樣點位置離地0.8m~1.5m左右(略高于工作面)；
b.可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點。
采樣點布置的規(guī)則見附錄A。
2.最少培養(yǎng)皿數(shù)
在滿足最少采樣點數(shù)目的同時，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見表1。
潔凈度級別 最少培養(yǎng)皿數(shù)（φ90mm）
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潔凈度級別 |
最少培養(yǎng)皿數(shù)（φ90mm） |
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100 |
14 |
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10 000 |
2 |
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100 000 |
2 |
|
300 000 |
2 |
采樣次數(shù)
每個采樣點一般采樣一次。
采樣注意事項
1.對于單向流潔凈室(區(qū))或送風口，采樣器采樣口朝向應正對氣流方向；對于非單向流潔凈室(區(qū))，采樣口向上。
2.布置采樣點時，至少應盡量避開塵粒較集中的回風口。
3.采樣時，測試人員應站在采樣口的下風側(cè)，并盡量少走動。
4.應采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對樣本的污染。
5.培養(yǎng)皿在用于檢測時，為避免培養(yǎng)皿運輸或搬動過程造成的影響，宜同時進行對照試驗，每次或每個區(qū)域取1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿(TSA或SDA)一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，結(jié)果應無菌落生長。
記錄
測試報告應包含以下內(nèi)容:
1.測試者的名稱和地址,測試日期；
2.測試依據(jù)；
3.被測潔凈室(區(qū))的平面位置(必要時標注相鄰區(qū)域的平面位置)；
4.有關測試儀器及其測試方法的描述：包括測試環(huán)境條件，采樣點數(shù)目以及布置圖，測試次數(shù)，或可能存在的測試方法的變更，測試儀器的檢定證書等；若為動態(tài)測試，則還應記錄現(xiàn)場操作。
5.人員數(shù)量及位置，現(xiàn)場設備運轉(zhuǎn)數(shù)量及位置等。
6.測試結(jié)果，包括所有統(tǒng)計計算資料。
結(jié)果計算
1.用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。
2.每個測點的沉降菌平均菌落數(shù)的計算,見式(1)。
結(jié)果評定
1.每個測點的沉降菌平均菌落數(shù)必須低于所選定評定標準中的界限。
2.在靜態(tài)測試時，若某測點的沉降菌平均菌落數(shù)超過評定標準，則應重新采樣兩次，兩次測試結(jié)果均合格才能判為符合。
日常監(jiān)控
對于沉降菌的監(jiān)控，宜設定糾偏限度和警戒限度，以保證潔凈室(區(qū))的微生物濃度受到控制。應定期檢測以檢查微生物負荷以及消毒劑的效力，并作傾向分析。靜態(tài)和動態(tài)的監(jiān)控都可以采用該方法。
對于沉降菌的取樣頻次，如果出現(xiàn)下列情況應考慮修改，在評估以下情況后,也應確定其他項目的檢測頻次：
1.連續(xù)超過糾偏限度和警戒限度；
2.停工時間比預計延長；
3.關鍵區(qū)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)有污染存在；
4.在生產(chǎn)期間,空氣凈化系統(tǒng)進行任何重大的維修；
5.日常操作記錄反映出傾向性的數(shù)據(jù)；
6.消毒規(guī)程的改變；
7.引起生物污染的事故等；
8.當生產(chǎn)設備有重大維修或增加設備時；
9.當潔凈室(區(qū))結(jié)構(gòu)或區(qū)域分布有重大變動時。
