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嘉峪檢測(cè)網(wǎng) 2025-03-11 20:49
說明：本文不只是洋蔥伯克霍爾德菌（Bcc）中國藥典檢查法公示稿和美國藥典 USP<60> 這兩個(gè)章節(jié)的比較，而是系統(tǒng)的搜集相關(guān)藥典章節(jié)及研究資料的檢查體系對(duì)比。
Bcc檢驗(yàn)流程圖
1.適用范圍
中國藥典：Bcc檢查法公示稿中未明確。通則1106（控制菌檢查）和通則1107（微生物限度標(biāo)準(zhǔn)）也沒有Bcc的修訂。
吸入用途的制劑以及口服、黏膜和鼻腔給藥的水溶液非無菌制劑（非無菌化學(xué)藥品及原輔料微生物限度研究技術(shù)指導(dǎo)原則（征求意見稿）藥品審評(píng)中心2022年10月）
美國藥典：吸入用途的制劑以及口服、黏膜和鼻腔給藥的水溶液非無菌制劑（USP<60>）
藥物成分或者藥物制劑的水份活度大于0.6，就要進(jìn)行Bcc檢查（USP<62>控制菌檢查征求意見稿）相關(guān)鏈接：美國藥典USP更新：洋蔥伯克霍爾德菌群檢測(cè)修訂
水性口服制劑、口腔黏膜用制劑、牙齦用制劑、皮膚用制劑、鼻用制劑、耳用制劑、陰道用制劑、經(jīng)皮貼劑和吸入用制劑如果水份活度大于0.6，控制菌標(biāo)準(zhǔn)必須包含Bcc（USP<1111>微生物限度標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿）
主要差異：USP體系更科學(xué)明確，利于執(zhí)行。中國藥典水分活度內(nèi)容也剛剛新增，一蹴而就不現(xiàn)實(shí)，期待2025年版增補(bǔ)本跟進(jìn)。
2.標(biāo)準(zhǔn)菌株
中國藥典：B.cepacia、B.cenocepacia、B.aenigmatica使用CMCC菌株編號(hào)
美國藥典：B.cepacia、B.cenocepacia、B.multivorans國際菌株編號(hào)（ATCC、NCTC、CIP等）
主要差異：CMCC菌株并沒有明確指出溯源于ATCC菌株。中國藥典并沒有采用B.multivorans，而納入了B.aenigmatica（神秘伯克霍爾德菌）。理由是：Bcc與高濃度干擾菌（如銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌）共存時(shí)，某些生長緩慢的Bcc菌株（如神秘伯克霍爾德菌）可能被漏檢【參考文獻(xiàn)1】。
3.培養(yǎng)基配方
中國藥典：Bcc選擇性瓊脂（BCCSA）
美國藥典：Bcc選擇性瓊脂（BCSA）
主要差異：BCCSA添加丙酮酸鈉和磷酸二氫鉀，去掉了乳糖，并減少了蔗糖、酚紅和結(jié)晶紫的用量，增強(qiáng)選擇性和指示特性。BCCSA顯著提高Bcc回收率（93%vs.BCSA的69%），且縮短菌落顯色時(shí)間（24小時(shí)內(nèi)可見明顯顏色變化），增強(qiáng)pH變化敏感性，從而提升菌落與培養(yǎng)基顏色對(duì)比度【參考文獻(xiàn)2】。
4.培養(yǎng)基適用性檢查
中國藥典：每批控制菌檢查用的商品化預(yù)制培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基的適用性檢查。（通則1106公示稿）
美國藥典：每批內(nèi)部滅菌培養(yǎng)基需檢查促生長、抑制和指示特性。（USP<1117>）
主要差異：都強(qiáng)調(diào)對(duì)培養(yǎng)基配制滅菌后進(jìn)行適用性檢查，美國藥典突出了“內(nèi)部滅菌”，而中國藥典突出了官方的對(duì)照培養(yǎng)基。
5.方法適用性試驗(yàn)
中國藥典：若抑菌性無法消除，需風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，選擇抑菌成分消除更徹底的方法。
美國藥典：若抗菌作用無法消除，可認(rèn)為Bcc不易存在于該供試品中（USP62）
主要差異：中國藥典強(qiáng)調(diào)生產(chǎn)單位或研制單位應(yīng)根據(jù)原輔料的微生物污染情況、生產(chǎn)工藝及產(chǎn)品特性進(jìn)行產(chǎn)品的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。如果能給出案例分享就更完美了。
6.陽性對(duì)照試驗(yàn)
中國藥典：要求基于質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理確定陽性對(duì)照的頻次，并選擇1株試驗(yàn)菌作為對(duì)照。
美國藥典：未詳細(xì)規(guī)定陽性對(duì)照的必要性和頻次。
7.菌落形態(tài)判斷
中國藥典：灰白、灰粉或土黃（棕）色菌落，培養(yǎng)基變橘紅或玫紅色。
美國藥典：綠棕色菌落帶黃色暈圈，或白色菌落周圍粉紅色區(qū)域。
主要差異：還是因?yàn)锽cc菌不同，培養(yǎng)基也不同。
8.結(jié)果報(bào)告和菌種分類更新
中國藥典：BCCSA上菌落如符合菌落形態(tài)特征，應(yīng)進(jìn)行適宜的鑒定。附表中列出25種Bcc成員，更新至2024年。
美國藥典：BCSA上的菌落均須進(jìn)行鑒定，包括菌落形態(tài)或其他鑒定手段。未明確列出Bcc具體成員
主要差異：結(jié)果報(bào)告原則雖然表述文字不同，但是意思是一樣的。中國藥典緊跟分類學(xué)發(fā)展，USP可能未涵蓋最新分類。一般控制菌檢查過程最后，如果在選擇性培養(yǎng)基上有疑似控制菌就要進(jìn)行“適宜的”鑒定。中美藥典中都另有章節(jié)（指導(dǎo)原則9204和USP<1113>）進(jìn)行技術(shù)上的討論。Bcc成員之間同源性比較高，不要說常規(guī)的生化鑒定手段不能區(qū)分，就連基因片段的測(cè)序也不行。
中國藥典附表中的25種Bcc就是靠最后的大殺器（全基因組）才可以完全區(qū)分。
截圖來自【參考文獻(xiàn)3】
總結(jié)
中國藥典與美國藥典在Bcc檢測(cè)流程幾乎一致，但是從以上的逐項(xiàng)對(duì)比可以看出：不一樣。
首先，從標(biāo)準(zhǔn)菌株選擇開始就有了不同，不說CMCC到底能不能與ATCC協(xié)調(diào)，中國藥典就選擇了新的Bcc菌株（B.aenigmatica）。
其次，因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)菌株的不同，再來評(píng)價(jià)培養(yǎng)基體系的時(shí)候就進(jìn)行了更符合中國藥典中Bcc的培養(yǎng)基成分。當(dāng)然，相應(yīng)的菌落形態(tài)也就不一樣了。
再次，檢查質(zhì)量控制流程部分（陽性對(duì)照、方法適用性以及培養(yǎng)基適用性檢查）中美藥典中距離開始縮小。
最后，如果在選擇性培養(yǎng)基上生長出符合Bcc形態(tài)的菌落，這是件非常麻煩的事情。按照美國藥典和PDA技術(shù)報(bào)告的要求，可以根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)的大小，選擇鑒定到分類學(xué)上的程度（屬、種還是株）。
中國藥典指導(dǎo)原則9204中也是這么要求的，但是在Bcc檢查法公示稿中列出了25種Bcc的分類學(xué)列表。
這是暗示要鑒定到這個(gè)程度嗎？我不知道。
（注：具體內(nèi)容以藥典最終版為準(zhǔn)，本文基于公示稿草案進(jìn)行分析。）
參考文獻(xiàn)：
1.王似錦，余萌，呂婷婷，徐鎧琳，馬仕洪，洋蔥伯克霍爾德菌群（Bcc）及干擾菌在不同增菌培養(yǎng)基中的生長研究，中國藥事2022年7月刊
2.余萌，王似錦，曹蕊，馬仕洪，洋蔥伯克霍爾德菌群（Bcc）的選擇和分離培養(yǎng)基研究，中國藥事2022年7月刊
3.余萌，王似錦，馬仕洪，洋蔥伯克霍爾德菌群（Bcc）的分類鑒定研究進(jìn)展，中國藥事2022年7月刊
來源：蒲公英Ouryao
