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嘉峪檢測網 2018-06-11 16:38
β-葡萄糖苷酶活性的測定方法
目前對于β-葡萄糖苷酶活性的測定方法很多，概括起來主要有電化法，熒光法，分光光度法等.
1)Barush和Swiain法，也就是分光光度法：它以水楊苷做底物，將水楊苷裂解為水楊醇和葡萄糖，然后將酶解產物中的水楊醇用4-氨基安替比林顯色，再用分光光度法比色測定；也可用熊果苷作為底物，對產生的葡萄糖可用碘量法加以測定。
2）熒光法;用4-甲基傘形酮β-D-葡萄糖苷作為底物，經β-葡萄糖苷酶作用，專一地分解為4-甲基傘形酮，利用傘形酮與4-甲基傘形酮具強烈熒光特點，通過測定酶解有力出的4-甲基傘形酮的熒光的特點，通過測定酶解游離出的4-甲基傘形酮的熒光吸光度計算酶的活性。
3）比色法，以對小雞苯基β-D-葡萄糖苷作為底物進行酶解，底物水解后釋放出來的對硝基苯酚在400-420nm可見光范圍內有特征吸收峰，可直接在400-420nm之間比色測定。
4）梁華正等人研究了以京尼平苷為底物檢測β—葡萄糖苷酶活性的一種新方法。京尼平苷經β-葡萄糖苷酶水解后產生京尼平，京尼平能與氨基酸反應生成穩定的藍色，在590nm處有特征吸收峰。β-葡萄糖苷酶活力在0.0-1U/ml范圍里呈線型關系，最低檢出限為0.02U/ml。
另外還有電化法，該方法是以扁桃苷作為底物，根據所產生的氫化物，用于自發（內）電解池相聯結的一對銀-鉑電極的方法來測定其β-葡萄糖苷酶活性。
以水楊苷酶反應底物的Barush和Swiain法檢測的是經β-葡萄糖苷酶水解底物產生的極微量的葡萄糖，反應易受干擾，且檢測靈敏度不高。熒光法最初用于酶含量低的高等動物組織中的β葡萄糖苷酶的檢測，靈敏度高且快速，但是由于實驗過程操作復雜，且重復性不好，現在應用不多。以對硝基本機-β-D葡萄糖苷為酶底物的比色法最為普遍，且在實驗中該方法操作簡單，快速，靈敏度高重現性好。以京尼平苷為底物檢測β-葡萄糖苷酶活性的方法與pNPG法相比，靈敏度低，但是精密度和準確度較好，結果穩定。
參考文獻：李華.高麗 β-葡萄糖苷酶活性測定方法的研究[N].食品與生物技術學報.2007年3月（第26卷第2期）
來源：AnyTesting
