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皮膚致敏試驗開展的目的就是為了驗證產品是否存在潛在的致敏風險，通過試驗結果能夠系統地展示產品的安全性。

作用機制

下面為大家簡單介紹引起皮膚發生致敏反應的作用機制：

當我們使用浸提液或樣品一次或多次接觸表皮后,在免疫系統的組分的引發和誘導下，人體會出現致敏反應。關鍵是半抗原(化學物)必須存在于皮膚并能向里滲透，然后與皮膚蛋白結合后才能形成免疫原性復合物。存在于表皮/真皮接緣處的朗罕氏細胞將抗原遞呈給特異性淋巴細胞，而后活化的淋巴細胞引發免疫反應。這些淋巴細胞中有一小部分為長壽命的記憶細胞，它們在激發階段作為初始激活因子，這樣以后再次接觸同一抗原時，活化的淋巴細胞釋放淋巴因子，引起其他炎癥細胞至反應局部，從而導致一系列有害反應。同時，皮膚致敏試驗屬于“基本三項”檢測，它的適用范圍非常廣泛，基本上是適用于所有種類的樣品。

皮膚致敏試驗常見的方法包括最大劑量法（GPMT）和封閉貼敷法（Buehler），本篇文章中著重為大家介紹最大劑量法。

測試方式的選擇

皮膚致敏試驗（最大劑量法）分為兩種接觸方式，分別是直接接觸法和浸提液測試。

兩種測試方法在操作上也會略有不同：

直接接觸法是將試驗材料直接與接觸部位接觸（注射或敷貼）；

而浸提液測試則不同，需要將提前制備好的浸提液與接觸部位接觸（注射或敷貼）。

那么，不同的樣品又該如何選擇上述的兩種接觸方式呢？下方表格會直觀地展示給大家以供選擇：

測試方法

使用極性浸提介質（0.9% 氯化鈉溶液）和非極性浸提介質（芝麻油）浸提檢測樣品。將每份浸提液皮下注射到10只測試組豚鼠，隨后進行敷貼。同樣地，將每份空白浸提介質皮下注射到5只對照組豚鼠，隨后進行敷貼。恢復后，分別對測試組和對照組的豚鼠貼上含有檢測品浸提液和對應空白浸提介質的激發敷貼。敷貼去除后，分別于24小時和48小時時記錄所有注射部位的得分。

觀察指標

首次激發后或再次激發接觸后(24±2)小時，剃去激發部位及其周圍部位的動物被毛。剃毛后至少2小時，按表1給出的分級標準對試驗部位評分，并在除去激發敷貼片后(48±2)h再進行評分。為了將結果評價偏差降至最低限度，最好由不知試驗處置信息的人員進行讀數。

結果評價

按Magnusson和Kligman分級標準，對照組動物分級小于1，而試驗組中分級大于或等于1時一般提示致敏；

如對照組動物分級大于或等于1時，試驗組動物反應超過對照組中最嚴重的反應則認為致敏；

如為疑似反應，推薦進行再激發以確認首次激發結果；

試驗結果顯示為試驗和對照動物中的陽性激發結果的發生率。

表1 Magnusson和Kligman分級標準

周期陽性對照

皮膚致敏試驗結果取決于許多動物相關因素和有關實驗室間試驗結果差異性解釋的技術因素，因此，為保證試驗的再現性和敏感性，應定期進行陽性對照試驗。

陽性對照樣品為：二硝基氯苯（DNCB）溶解在無水乙醇中，質量體積比為0.1%。應獲得輕度或中度陽性反應。