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【摘要】目的 通過比較鹽酸乙胺丁醇片在四種介質(zhì)中的溶出行為，獲得具有區(qū)分力的溶出曲線，并以此為依據(jù)，篩選出溶出曲線與參比制劑最為相近的制備工藝。方法 建立具有區(qū)分力的溶出曲線測(cè)定方法，以該溶出條件考察不同制備工藝自制制劑的溶出行為，采用相似因子（f2）法與參比制劑比較溶出曲線，得到最相近的制備工藝。結(jié)果 溶出曲線方法采用槳法，溶出介質(zhì)為水介質(zhì)，體積為900 ml，轉(zhuǎn)速為50 r/min，HPLC 法檢測(cè)；濕法制粒法和流化床制粒法的制備工藝對(duì)應(yīng)的f2 因子分別為31.1、60.4，表明流化床制粒法與參比制劑制備工藝最為相似。結(jié)論 具有區(qū)分力的溶出曲線可用于鹽酸乙胺丁醇片制備工藝的篩選；兩種制備工藝所得片劑溶出行為具有顯著差異；流化床制粒法所得片劑與參比制劑體外溶出行為最相似。

乙胺丁醇作為一線抗結(jié)核藥品，常與利福平、異煙肼、吡嗪酰胺合用治療各種肺結(jié)核及肺外結(jié)核，被認(rèn)為是安全有效、不良反應(yīng)發(fā)生率較低的重要藥物[1]。鑒于全球還有很多人感染結(jié)核病，當(dāng)今結(jié)核病仍未有效控制，世界范圍內(nèi)對(duì)抗結(jié)核藥的需求仍然巨大，因此有必要開展鹽酸乙胺丁醇片仿制制劑與參比制劑的一致性評(píng)價(jià)研究，提高仿制制劑的質(zhì)量。而采用有區(qū)分力的溶出曲線來剖析仿制制劑的內(nèi)在質(zhì)量，是用于評(píng)估仿制制劑處方工藝、獲得參比制劑關(guān)鍵特征以及提高生物等效性試驗(yàn)通過率的重要手段之一[2]。本研究采用了日本上市的Ebutol ® Tablets 250 mg 作為參比制劑[3]，以具有區(qū)分力的溶出曲線為依據(jù)，篩選出與參比制劑最為相近的制備工藝，為仿制制劑放大生產(chǎn)工藝的確定提供參考，并為提高生物等效性試驗(yàn)的通過率提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

GH-200 型電子分析天平（日本AND 公司）；FADT-1202自動(dòng)溶出試驗(yàn)儀（上海富科思分析儀器有限公司）；紫外分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；高效液相色譜儀Agilent 1260[ 安捷倫科技（中國(guó)）有限公司]。

1.2 材料

鹽酸乙胺丁醇片（規(guī)格：250 mg，廣州白云山明興制藥有限公司）；鹽酸乙胺丁醇片參比制劑（規(guī)格：250 mg，日本科研株式會(huì)社）；鹽酸乙胺丁醇對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院）；氯化鈉、醋酸鈉、磷酸二氫鉀、十二水合磷酸氫二鈉、鹽酸、冰醋酸、磷酸、氫氧化鈉、醋酸銨、醋酸銅均為分析純，甲醇為色譜純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 自制制劑的制備

采用相同的制劑處方，以濕法制粒工藝和流化床制粒工藝制備鹽酸乙胺丁醇片的自制制劑，兩種工藝的過程描述如下。

2.1.1 濕法制粒工藝

采用濕法制粒壓片技術(shù)，步驟如下：①過篩：將原料藥和輔料分別過篩備用；②混合：將原輔料置于濕法制粒機(jī)中混合均勻；③制粒：將粘合劑噴入上步混合均勻的粉末中制軟材，12 目篩濕整粒；④干燥：將所制顆粒加入流化床，干燥至水分合格；⑤總混、壓片：加入處方量的硬脂酸鎂混合均勻后壓片；⑥包衣：將薄膜包衣預(yù)混劑加入水中攪拌成均勻狀態(tài)的混懸液，包衣即得。

2.1.2 流化床制粒工藝

采用流化床一步制粒技術(shù)，步驟如下：①過篩：將原料藥和輔料分別過篩備用；②制粒、干燥：將噴槍安裝于適宜高度噴孔，設(shè)定適宜的霧化壓力、進(jìn)風(fēng)風(fēng)量、進(jìn)風(fēng)溫度，噴入粘合劑溶液，控制流速進(jìn)行制粒，制粒結(jié)束后直接進(jìn)行干燥，并干燥至水分合格；③整粒：30 目篩整粒；④總混、壓片：加入處方量的硬脂酸鎂混合均勻后壓片；⑤包衣：將薄膜包衣預(yù)混劑加入水中攪拌成均勻狀態(tài)的混懸液，包衣即得。

2.2 溶出曲線分析方法的建立

由于選用日本科研株式會(huì)社的鹽酸乙胺丁醇片作為參比制劑，自制制劑的多介質(zhì)溶出曲線分析方法基于日本橙皮書進(jìn)行開發(fā)，同時(shí)參考中國(guó)藥典ChP2020 鹽酸乙胺丁醇片的溶出度分析方法，建立溶出曲線分析方法。

2.2.1 溶解性

參照中國(guó)藥典ChP2020，通過搖瓶法測(cè)定利鹽酸乙胺丁醇在pH1.2 鹽酸溶液、pH4.0 醋酸鹽緩沖液、pH6.8 磷酸鹽緩沖液和純化水中的飽和溶解度[4]。結(jié)果鹽酸乙胺丁醇在4 種溶出介質(zhì)中飽和溶解度分別為836.2 mg/ml、835.3 mg/ml、845.9 mg/ml、841.0 g/ml，溶解性良好且溶解度受pH 值影響不大。

2.2.2 溶出曲線試驗(yàn)方法

選擇pH1.2 鹽酸鹽溶液、pH4.0 醋酸鹽緩沖液、pH6.8 磷酸鹽緩沖液和純化水作為四種溶出介質(zhì)，溶出條件為槳法，50 r/mim，溶出介質(zhì)體積為900 ml，取樣時(shí)間點(diǎn)為10、20、30 min。

2.2.3 溶出曲線定量方法

檢測(cè)方法為高效液相色譜法（HPLC），色譜條件如下：色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動(dòng)相：醋酸銨/ 醋酸銅溶液- 甲醇＝ 88∶12（V/V）；流速：1.0 ml/min；柱溫：40℃ ；進(jìn)樣量：10 μl；檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm。

2.3 方法驗(yàn)證

2.3.1 專屬性試驗(yàn)

取供試品溶液、對(duì)照品溶液、空白輔料溶液及四種溶出介質(zhì)分別按2.2.3 項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣。結(jié)果顯示，在四種溶出介質(zhì)條件下，溶出介質(zhì)和空白輔料在乙胺丁醇出峰處不出峰，無干擾，樣品溶液的主峰保留時(shí)間與對(duì)照品溶液一致，該方法專屬性良好。

2.3.2 線性范圍

精密稱取鹽酸乙胺丁醇對(duì)照品約70 mg，置100 ml 容量瓶中，加純化水稀釋制成約700 μg/ml 對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。精密量取鹽酸乙胺丁醇對(duì)照品儲(chǔ)備液1、2、2、10、5 ml 分別置于25、25、10、25、10 ml 量瓶，作為線性10%、20%、50%、100%、125% 水平溶液，分別進(jìn)樣檢測(cè)，以峰面積對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸。4 種介質(zhì)平行操作，結(jié)果見表1。

結(jié)果顯示，4 種溶出介質(zhì)條件下，鹽酸乙胺丁醇在10% ～ 125%樣品濃度范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)的平方r 2 均為1.000（＞ 0.995），線性結(jié)果符合可接受標(biāo)準(zhǔn)。

2.3.3 準(zhǔn)確度

精密稱取空白輔料適量置于不同1 000 ml 量瓶，分別加入約27.8、278 及347.5 mg 鹽酸乙胺丁醇原料藥，用溶出介質(zhì)定容至刻度，每個(gè)濃度平行操作3 份，分別配制成高、中、低3 個(gè)水平的回收率溶液，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，按2.2.3項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。4 種介質(zhì)平行操作，10% 準(zhǔn)確度溶液的回收率為91.7% ～ 100.2%（在80.0% ～ 120.0% 之間）；RSD 為0.5% ～ 3.2%（＜ 20%）；100% ～ 125% 準(zhǔn)確度溶液的回收率為99.7% ～ 101.8%（在95.0% ～ 105.0% 之間）；RSD 為0.1% ～ 0.5%（＜ 5%）；9 份樣品溶液回收率的RSD為0.5% ～ 3.2%（＜ 15%）。鹽酸乙胺丁醇各濃度的回收率和RSD 結(jié)果符合可接受標(biāo)準(zhǔn)，說明該方法準(zhǔn)確度良好。

2.3.4 重復(fù)性及中間精密度

取自制制劑6 片，按照“2.2.2”項(xiàng)下的溶出試驗(yàn)方法，在10、20、30 min 時(shí)取樣測(cè)定；另取同批號(hào)的自制制劑6 片，由不同分析員，在不同的日期采用不同的儀器同法取樣測(cè)定。4 種介質(zhì)平行操作，不同分析人員在10 min 和20 min 取樣時(shí)間點(diǎn)平行6 份樣品溶液的溶出度平均值為37% ～ 75%（＜ 85%），差值為1% ～ 2%（＜ 10%）；在30 min 取樣時(shí)間點(diǎn)平行6 份樣品溶液的溶出度平均值為88% ～ 95%（＞ 85%），差值為1% ～ 4%（＜ 5%）。不同分析人員各自在10 min 時(shí)6 份樣品的RSD 為6.3% ～ 10.5%（＜ 20%），12 份樣品的RSD 為7.9% ～ 9.6%（＜ 20%）；在20 min和30 min 時(shí)6 份樣品的RSD 為4.0% ～ 9.8%（＜ 15%），12 份樣品的RSD 為4.9% ～ 8.5%（＜ 15%）。結(jié)果表明，該試驗(yàn)方法的重復(fù)性及中間精密度良好。

2.3.5 溶液穩(wěn)定性

取“2.3.4”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液及任一杯樣品溶液，分別于2℃～8℃冰箱和室溫放置2 d 后進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示，在4 種介質(zhì)中，在2℃～8℃冰箱和室溫條件下貯存2 d 的對(duì)照品溶液與0 d 相比，回收率為98.0%～101.1%（在98.0%～102.0%之間）；在2℃～8℃冰箱和室溫條件下貯存2 d 的樣品溶液與0 d 相比，回收率為98.0%～101.9%（在98.0%～102.0% 之間），說明對(duì)照品和樣品在四種介質(zhì)中穩(wěn)定性良好。

2.4 采用有區(qū)分力的溶出曲線篩選制備工藝

以“2.1”項(xiàng)下所述的兩種工藝制備鹽酸乙胺丁醇片，以日本科研株式會(huì)社的市售產(chǎn)品（批號(hào)：L69680）作為參比制劑，以“2.2”項(xiàng)下的溶出曲線試驗(yàn)方法對(duì)制備工藝進(jìn)行篩選。參照《普通口服固體制劑溶出曲線測(cè)定與比較指導(dǎo)原則》[5] 的溶出曲線相似性比較要求，當(dāng)仿制制劑與參比制劑在15 min 的平均溶出度＜ 85%，則進(jìn)行相似因子f2 的比較，若相似因子f2 ≥ 50，可認(rèn)為兩者溶出曲線相似。即制備工藝以所得溶出曲線與參比制劑相似者，且f2 因子數(shù)值最大者為佳。

2.4.1 參比制劑多介質(zhì)溶出曲線

取日本科研株式會(huì)社的市售產(chǎn)品按“2.2”項(xiàng)下的方法進(jìn)行溶出曲線的考察，在四種溶出介質(zhì)中溶出曲線比較見圖1。

結(jié)果顯示，參比制劑在4 個(gè)介質(zhì)中溶出行為差異不大，而純化水較其他3 個(gè)介質(zhì)更環(huán)保、方便易得，因此選取純化水作為篩選不同制備工藝的區(qū)分介質(zhì)。

2.4.2 不同制備工藝的自制制劑與參比制劑的溶出曲線比較

取濕法制粒工藝自制制劑、流化床制粒工藝自制制劑按“2.2”項(xiàng)下的方法進(jìn)行溶出曲線的考察，在純化水中溶出曲線與參比制劑相比所得的f2 因子結(jié)果見表2，溶出曲線比較圖見圖2。

由兩種不同制備工藝所得的自制制劑與參比制劑的f2 因子的結(jié)果（表2）可知，采用流化床制粒工藝所得片劑在水介質(zhì)溶出f2 值＞ 50，溶出行為與參比制劑相似，具有較好的工藝可行性，據(jù)此判斷采用流化床制粒工藝為較佳處方。

2.4.3 流化床制粒工藝制備的自制制劑在四種介質(zhì)中的溶出曲線考察

采用流化床一步制粒的工藝制備1 批自制制劑（022-00592-22）與參比制劑（L69680），按“2.2”項(xiàng)下的方法，考察自制制劑與參比制劑在四種不同介質(zhì)下的溶出行為。溶出結(jié)果見圖3。結(jié)果表明，自制制劑在四種介質(zhì)中溶出與參比制劑f2 相似值均＞ 60，具有溶出一致性，流化床一步制粒工藝可篩選為鹽酸乙胺丁醇片的制備工藝。

3 討論

3.1 溶出曲線檢測(cè)方法的選擇

日本橙皮書采用UV 法，供試品溶液需采用二氯甲烷萃取，操作繁瑣，分析效率低。ChP2020 采用HPLC 法，與含量方法一致，而且HPLC 法專屬性好，準(zhǔn)確度高，自動(dòng)化高，故以ChP2020鹽酸乙胺丁醇片含量分析方法的色譜條件為基礎(chǔ)，開發(fā)并優(yōu)化溶出曲線樣品的檢測(cè)方法。

3.2 結(jié)論

在口服固體制劑品質(zhì)評(píng)價(jià)和仿制藥一致性評(píng)價(jià)中，最為有效的手段就是建立能體現(xiàn)參比制劑內(nèi)在質(zhì)量、具有區(qū)分力的溶出曲線。在固體制劑制備工藝中，制粒技術(shù)是最關(guān)鍵的技術(shù)之一。制粒過程中所得顆粒的粒徑大小或密度高低，都會(huì)影響可壓性，最終影響產(chǎn)品的溶出行為[5]。

本文建立具有區(qū)分力的溶出曲線試驗(yàn)方法，對(duì)不同的制粒制備工藝進(jìn)行了篩選，通過自制制劑與參比制劑的多條有區(qū)分力的溶出曲線相似，確定采用流化床一步制粒工藝制備鹽酸乙胺丁醇片。