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抗生素殘留量的檢測方法 

隨著社會的進步和人們對抗生素殘留的日益重視，在客觀上就要求改進傳統的檢測方法。引進先進的檢測儀器，尋求一種快速、精確的檢測方法，使得檢測結果更加準確、可靠。

微生物檢測方法

微生物檢測方法的主要原理是根據抗微生物藥對特異微生物的抑制作用，來定性或定量檢測受檢樣品中殘留的抗微生物藥。微生物檢測法應用較為廣泛，是抗生素殘留檢測的傳統方法，但測定時間長，結果誤差較大，操作復雜。其優點是費用低，一般實驗室都能操作。

氯化三苯四氮唑法（TTC）

這是目前我國食品衛生標準中用來檢查牛乳中抗生素殘留的檢測方法。如果牛乳中有抗生素存在，當乳中加入菌種（嗜熱鏈球菌）經培養后，菌種不增殖。此時，加入的TTC 指示劑不發生還原反應，所以仍呈無色狀態。如果沒有抗生素存在，則加入菌種就可增殖，TTC 還原變成紅色，使樣品染成紅色。

棉拭法或紙片法

這是檢測胴體內可疑抗生素殘留的現場試驗方法，簡便而又有一定準確性，被世界普遍采用，具有廣域的靈敏性。它是用棉拭插入待檢部位浸潤20min取出，放入有枯草桿菌的培養基中培養18h～24 h，或用圓濾紙從腎臟或乳取樣，與含有枯草桿菌等細菌的營養瓊脂貼合培養，通過觀察棉拭周圍有無抑菌圈或根據其大小判定有無抗菌物質存在。該法的特點是能夠確定抗生素的種類，提高檢出率和準確率。如，氯霉素最低檢出限量為0.01mg/kg、土霉素為0.05mg/kg等。

杯蝶法

樣品經處理后，注入牛津杯中，與含菌液的檢定平板貼合。培養后，根據抑菌圈的有無及大小判定結果。采用不同的試驗菌種，可檢測不同的抗生素。如檢測肉中四環素類抗生素用蠟樣芽孢桿菌；檢測青霉素用金黃色葡萄球菌；檢測鏈霉素或雙氫鏈霉素用枯草桿菌。

電泳生物檢測法

該法靈敏度較高。Fusac（1989）應用電泳和微生物自顯影技術測定動物組織中殘留的氨基糖苷類抗生素（如，雙氫鏈霉素、卡那霉素等），取得了滿意的結果。

瓊脂擴散法

Korkela 以豬腎為樣品采用瓊脂擴散法對幾種抗生素殘留檢測進行了比較。能檢測出土霉素和鏈霉素的殘留。Untermann（1986）報道，采用枯草桿菌進行瓊脂擴散法檢測出了牛、豬及山羊的肌肉中和腎臟內抗生素的殘留。

儀器檢驗方法

儀器檢驗方法是利用抗生素分子中的基團所具有的特殊反應或性質來測定其含量，進行定性定量

和藥劑鑒定。其敏感性較高，但有的檢測程序較復雜或檢測費用較高。

液相色譜法（LC）

德國Russel 報道了液相色譜法檢測氯霉素殘留，檢測限為10μg/kg，回收率為63%～79%。Jefery等（1994）報道了用LC法測定沙拉沙星在海峽鲇魚肌肉中的殘留，沙拉沙星的檢測限為1.4ng/g，回收率為85.4％～104％。

氣相色譜法（GC）

該法有許多高靈敏、通用性或專一性強的檢測器供選用。Plomp和Maes報道了在血液和羊水中甲砜霉素的快速氣相色譜檢測方法，檢測限為0.1μg/mL，甲砜霉素血清的回收率為91.3％，羊水的回收率為90.3％。

薄層色譜法（TLC）

該法經常作為樣品篩選方法。其優點是速度快，有利于現場應用，且已在飼料、組織和體液等的分析中得到了廣泛的應用。Bossuyt 等（1976）報道用TLC 法測定牛奶中新霉素的殘留。但新霉素的檢測限為15μg/g，遠高于牛奶中的新霉素殘留限量。

高效薄層色譜法（HPTLC）

該法現已成為僅次于HPLC的殘留分析法。HPTLC在獸藥殘留的快速篩選檢測方面應用廣泛。測定組織樣品時需在樣品展開后噴以硫酸- 高氯酸試液，靈敏度可提高10倍，檢測限達10μg/kg。

高效液相色譜法（HPLC）

這是目前廣泛應用的一種理化檢測方法。該法對抗生素殘留的檢測具有較高的靈敏性。Anadan等（1995）報道了用HPLC法測定雞脂肪、肝臟、腎臟、肺臟及皮膚中恩諾沙星及代謝產物環丙沙星濃度，檢測限為0.003 μg/g，在各種組織中提取回收率均大于70％。Rolinski 等（1997）用HPLC 法檢測了肉雞組織和雞蛋中諾氟沙星殘留，檢測限為0.0025μg/g。

超臨界流體色譜法（SFC）

該法可彌補GC和HPLC法的不足，但不可能取代二者。SFC 最大優點是可以方便地連接各種靈敏的檢測器。Pensabene 等將雞蛋樣品進行超臨界流體萃取后進行磺胺類藥物的殘留分析，檢測限為25 μg/kg，回收率為81％~101%。

毛細管電泳法（CE）

Ackermans 等將豬肉樣品加乙腈提取，離心后上清液過濾膜后直接進行毛細管區帶電泳分析。測出肉樣中15 種磺胺類藥物的檢測限在2 mg/kg~9mg/kg 的范圍內。

聯用技術

聯用技術可揚長避短，一般兼分離、定量和定性（分子結構信息）于一體，因而特別適用于確證性分析。常見的聯用技術有薄層色譜- 質譜（TLC-MS）、氣相色譜- 質譜（GC-MS）、液相色譜-質譜（LC-MS）等。色譜和質譜聯用由于實現了高效層析分離和檢測聯機，可用微電腦控制層析條件、程序和數據處理，其特異性、靈敏度和重復性均好，并可一次同時完成同一樣本中多種藥物及其代謝物的檢測。

免疫分析法

免疫分析法主要有放射免疫分析（RIA）、酶免疫分析（EIA）、熒光免疫分析（FIA） 和酶聯免疫吸附法（ELISA）。與常規的理化分析技術相比，免疫分析技術最突出的優點是操作簡單、容量大、速度快、儀器化程度低且分析成本低，分析效率則為HPLC 或GC 的幾十倍以上。免疫分析法能與其他技術聯用。

放射免疫分析（RIA）

Mahon 等曾將卡那霉素與人血清白蛋白直接連接制備結合抗原，并建立了血清樣品的放射免疫測定法，檢測限為10 ng/mL。1984 年Arnold 等即建立了氯霉素的放射免疫測定法，其檢測限為0.21μg/kg。

酶聯免疫吸附法（ELISA）

Prithipal Singh 等（1989） 建立了檢測豬血中磺胺二甲嘧啶的ELISA 方法，其檢測范圍為10ng/mL~1 000 ng/mL。國內劉智宏等（1998） 建立了檢測血清中磺胺二甲基嘧啶的ELISA 方法，其檢測限為50 ng/mL。楊紅（1999） 建立了測定牛奶、豬血漿等樣本的ELISA 檢測方法，其檢測限約0.025 ng/mL。