食用植物油中乙基麥芽酚的測定
（BJS 201708）
1、范圍
本方法規定了食用植物油中乙基麥芽酚的液相色譜-串聯質譜定性確證和定量測定方法。
本方法適用于芝麻油、芝麻調和油、菜籽油等食用植物油中乙基麥芽酚的確證及測定。
2、原理
用甲醇提取試樣中的乙基麥芽酚后，采用液相色譜-串聯質譜儀檢測，外標峰面積法定量。
3、試劑和材料
除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規定的一級水。
3.1 試劑
3.1.1甲醇（CH3OH)：色譜純。
3.1.2甲酸（HCOOH）：色譜純。
3.2 乙基麥芽酚標準品
乙基麥芽酚標準品的分子式、相對分子量、CAS登錄號見表1，純度≥99%。
表1 乙基麥芽酚標準品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量
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中文名稱 |
英文名稱 |
CAS登錄號 |
分子式 |
相對分子量 |
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乙基麥芽酚 |
Ethyl maltol |
4940-11-8 |
C7H8O3 |
140.14 |
3.3 標準溶液配制
3.3.1乙基麥芽酚標準儲備溶液：準確稱取乙基麥芽酚標準品（3.2）100.0mg（精確至0.000 1 g），用甲醇溶解并定容至100 mL，此溶液濃度為1 mg/mL。貯存于4℃冰箱中，有效期3個月。
3.3.2乙基麥芽酚標準系列工作溶液：將乙基麥芽酚標準儲備溶液（3.3.1）用甲醇逐級稀釋成1.25µg/mL、2.5µg/mL、5µg/mL、25µg/mL、50µg/mL標準系列溶液，準確稱取與試樣基質相應的陰性試樣10g（精確至0.01g），分別加入標準系列溶液200µL，與試樣同時進行提取，制成最終濃度為12.5ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、250ng/mL、500ng/mL標準系列工作溶液。臨用時配制。
3.4 0.1%甲酸水溶液：取甲酸1mL用水稀釋至1000mL，用濾膜（0.22 µm，水相）過濾后備用。
3.5 0.1%甲酸甲醇溶液：取甲酸1mL用甲醇稀釋至1000mL，用濾膜（0.22 µm，有機相）過濾后備用。
4、儀器和設備
4.1液相色譜-串聯質譜儀：配有電噴霧離子源。
4.2 渦旋振蕩器。
4.3 分析天平：感量為0. 1 mg和0.01 g。
4.4 離心機：可冷卻至4℃，轉速9000 r/min以上。
4.5 具塞刻度試管：20 mL。
4.6 聚丙烯離心管：50 mL。
4.7 移液器：10 mL和250µL。
5、分析步驟
5.1 試樣制備
準確稱取10g試樣（精確至0.01g）置于50 mL聚丙烯離心管中，用移液器準確加入10mL甲醇(3.1.1)，渦旋振搖2min，4℃條件下9000 r/min離心10min，將上清液移入20mL具塞刻度試管中，下層油液再用10mL甲醇重復提取一次，合并上清液，用甲醇定容至20mL，經微孔濾膜（0.22 µm，有機相）過濾，供液相色譜-串聯質譜分析。
5.2 儀器參考條件
5.2.1 液相色譜條件
a)色譜柱：C18色譜柱，100mmX 2.1mm（i.d.），1.7μm，或性能相當者。
b)流動相：A 為0.1%甲酸水溶液（3.4），B 為0.1%甲酸甲醇溶液（3.5），梯度洗脫程序見表2。
c)流速：0.3 mL/min。
d)柱溫：40℃。
e)進樣量：2μL。
表2 梯度洗脫程序
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時間/min |
流動相比例/（%） |
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流動相A |
流動相B |
|
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0 |
50 |
50 |
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0.5 |
50 |
50 |
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1.5 |
15 |
85 |
|
2 |
15 |
85 |
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4 |
5 |
95 |
|
5 |
5 |
95 |
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5.1 |
50 |
50 |
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7 |
50 |
50 |
5.2.2 質譜條件
a）電離方式：電噴霧正離子模式；
b）監測方式：多反應監測（MRM）；
c）氣簾氣：40 psi；
d) 碰撞氣：7 psi；
e）離子噴霧電壓：5500V；
f）離子源溫度：600℃；
g）定性離子對、定量離子對、去簇電壓和碰撞能見表3。
表3 乙基麥芽酚的定性離子對、定量離子對、去簇電壓和碰撞能
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中文名稱 |
定性離子對/(m/z) （母離子/子離子） |
定量離子對/(m/z) （母離子/子離子） |
去簇電壓/V |
碰撞能/V |
|
乙基麥芽酚 |
141.1/126.1 |
141.1/126.1 |
130 |
27 |
|
141.1/71.0 |
130 |
37 |
5.3 定性確證
按照儀器參考條件（5.2）測定試樣溶液和標準工作溶液，如果試樣中的乙基麥芽酚質量色譜峰保留時間與標準工作溶液一致（變化范圍在±2.5%之內）；且試樣中乙基麥芽酚的兩個子離子的相對豐度比(k)與濃度相當標準工作溶液中乙基麥芽酚的兩個子離子的相對豐度比相比，其允許偏差不超過表4規定的范圍，則可判定為試樣中存在乙基麥芽酚。
表4 定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差
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相對離子豐度（%） |
k>50 |
50≥k>20 |
20≥k>10 |
k≤10 |
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允許的最大偏差（%） |
± 20 |
± 25 |
± 30 |
± 50 |
乙基麥芽酚的參考保留時間約為1.35 min，質量色譜圖參見附錄A中圖A.1-圖A.2。
5.4定量測定
5.4.1 工作曲線的制作
將乙基麥芽酚標準系列工作溶液（3.3.2）按儀器參考條件（5.2）進行測定，得到相應的標準系列工作溶液的質量色譜峰面積。以標準系列工作溶液的濃度為橫坐標，以質量色譜峰的峰面積為縱坐標，繪制工作曲線。
5.4.2 試樣溶液的測定
將試樣溶液（5.1）按儀器參考條件（5.2）進行測定，得到相應的試樣溶液的質量色譜峰面積。根據工作曲線得到試樣溶液中乙基麥芽酚的濃度。
6、結果計算
試樣中乙基麥芽酚含量按式（1）計算：
…………………………………………（1）
式中：
X—試樣中乙基麥芽酚的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；
c—由工作曲線得出的試樣溶液中乙基麥芽酚的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；
V—試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）；
m—試樣質量，單位為克（g）；
計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留三位有效數字。
7、回收率及精密度
芝麻油、芝麻調和油、菜籽油中乙基麥芽酚加標濃度為25μg/kg、50μg/kg和250μg/kg時，乙基麥芽酚的回收率在80.5% ~ 109.3%之間，精密度在0.7%~6.2%之間。
8檢出限
當取樣量為10.00g，定容體積為20mL時，本方法中乙基麥芽酚的檢出限為25.0 μg/kg。
附錄A
乙基麥芽酚標準溶液多反應監測質量色譜圖
圖A.1乙基麥芽酚定量離子對質量色譜圖(m/z141.1/126.1)
圖A.2乙基麥芽酚定性離子對質量色譜圖(m/z141.1/71.0)
