乳及乳制品中硫氰酸根的測(cè)定
BJS 201709
1 范圍
本方法規(guī)定了離子色譜—電導(dǎo)檢測(cè)器檢測(cè)乳和乳制品中硫氰酸根的方法。
本方法適用于乳及乳制品（包括嬰幼兒配方乳粉，不包括特殊醫(yī)學(xué)用途嬰幼兒配方乳粉）中硫氰酸根的測(cè)定。
2 原理
樣品經(jīng)過(guò)稀釋?zhuān)译娉恋淼鞍缀螅^(guò)脫脂柱凈化，通過(guò)陰離子分析柱，根據(jù)分析柱對(duì)各離子的親和力不同而進(jìn)行分離，進(jìn)入電導(dǎo)檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，外標(biāo)法定量。
3 試劑和材料
除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為符合GB/T 6682中規(guī)定的一級(jí)水。
3.1 試劑
3.1.1 乙腈（CH3CN)：色譜純。
3.1.2 45 mmol/L氫氧化鉀溶液：稱(chēng)取2.52 g氫氧化鉀用水定容至1000 mL。
3.1.3 70 mmol/L氫氧化鉀溶液：稱(chēng)取3.92 g氫氧化鉀用水定容至1000 mL。
3.2 標(biāo)準(zhǔn)品
硫氰酸鈉標(biāo)準(zhǔn)樣品的分子式、相對(duì)分子量、CAS登錄號(hào)見(jiàn)表1，純度≥99%。
表1 硫氰酸鈉標(biāo)準(zhǔn)樣品的中文名稱(chēng)、英文名稱(chēng)、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量
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中文名稱(chēng) |
英文名稱(chēng) |
CAS登錄號(hào) |
分子式 |
相對(duì)分子量 |
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硫氰酸鈉 |
Sodium sulfocyanate |
540-72-7 |
NaSCN |
81.0722 |
3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
3.3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱(chēng)取硫氰酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品（3.2）0.1397 g，用水溶解，定容至100 mL，硫氰酸根離子含量為1 000 mg/L。貯存于4 ℃冰箱中，有效期6個(gè)月。
3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液：準(zhǔn)確吸取硫氰酸根離子的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.3.1）1.0 mL于1 000 mL 的容量瓶中，用水定容至刻度，硫氰酸根離子含量為1.0 mg/L。貯存于4 ℃冰箱中，有效期3個(gè)月。
3.3.3 標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：準(zhǔn)確吸取硫氰酸根離子的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（3.3.2）0.0、2.0、4.0、10.0、20.0 mL于一組100 mL 的容量瓶中，用水定容至刻度，配得濃度分別為0.0、0.020、0.040、0.100、0.200 μg/ mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。現(xiàn)用現(xiàn)配。
3.4 聚二乙烯基苯聚合物反相填料（或等效的脫脂柱）：250 mg/3 mL，可采用商品化RP柱。
3.5 海砂。
4 儀器和設(shè)備
4.1 離子色譜儀（IC）：帶電導(dǎo)檢測(cè)器和抑制器，可進(jìn)行二步梯度淋洗。
4.2 分析天平：感量分別為0.01 g和0.000 1 g。
4.3 冰箱：帶4 ℃冷藏。
4.4 超聲波清洗器。
5 分析步驟
5.1 樣品前處理
5.1.1 固體奶粉樣品
準(zhǔn)確稱(chēng)取樣品1 g（精確到0.01 g）于10 mL比色管中，加去離子水4 mL使充分溶解并混勻，再加入乙腈（3.1.1）定容至刻度并混勻，超聲萃取15 min后，于4 ℃冰箱中靜置10 min以沉淀蛋白。取上清液1 mL至10 mL比色管中，用水定容至刻度，將稀釋后的溶液經(jīng)過(guò)濾膜（水相，0.45 μm）和脫脂柱（3.4）過(guò)濾，濾液直接上機(jī)分析。
5.1.2 液體奶樣品
準(zhǔn)確量取樣品4 g（精確到0.01 g）于10 mL比色管中，再加入乙腈（3.1.1）定容至刻度并混勻，超聲萃取15 min后，于4 ℃冰箱中靜置10 min以沉淀蛋白。取上清液1 mL至10 mL比色管中，用水定容至刻度，將稀釋后的溶液經(jīng)過(guò)濾膜（水相，0.45 μm）和脫脂柱（3.4）過(guò)濾，濾液直接上機(jī)分析。
5.1.3 奶酪等固體樣品
準(zhǔn)確稱(chēng)取樣品0.50 g（精確到0.01 g），加入1 g海砂（3.5）研磨均勻，轉(zhuǎn)移至10 mL比色管中，加水4 mL使充分溶解混勻，再加入乙腈（3.1.1）定容至刻度并混勻，超聲萃取15 min后，于4 ℃冰箱中靜置10 min以沉淀蛋白。取上清液1 mL至10 mL比色管中，用水定容至刻度，將稀釋后的溶液經(jīng)過(guò)濾膜（水相，0.45 μm）和脫脂柱（3.4）過(guò)濾，濾液直接上機(jī)分析。
注：脫脂柱使用前依次用 10 mL 甲醇、15 mL 水通過(guò)，靜置活化 30 min。
5.2 離子色譜條件
5.2.1離子色譜柱參數(shù)：IonPac AS 16型陰離子分析柱 4 mm×250 mm (配備IonPac AG 16型陰離子保護(hù)柱 4 mm×50 mm)，或性能相當(dāng)者。
5.2.2流速：1.0 mL/min。
5.2.3電導(dǎo)檢測(cè)器：配4 mm的陰離子抑制器。
5.2.4進(jìn)樣量：100 µL。
5.2.5淋洗液：氫氧化鉀溶液（3.1.2和3.1.3）梯度洗脫，洗脫梯度見(jiàn)表2。
表2 淋洗液梯度程序
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時(shí)間/min |
氫氧化鉀濃度/(mmol/L) |
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0.0 |
45.0 |
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13.0 |
45.0 |
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13.1 |
70.0 |
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18.0 |
70.0 |
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18.1 |
45.0 |
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23.0 |
45.0 |
5.3 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線制作
將標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（3.3.3）按儀器參考條件（5.2）進(jìn)行測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。
硫氰酸根離子標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜分離圖見(jiàn)附錄A。
5.4 樣品測(cè)定
取樣品處理液，儀器參考（5.2）進(jìn)行測(cè)定，以保留時(shí)間定性，測(cè)量樣品溶液的峰面積響應(yīng)值，采用外標(biāo)法定量。樣品溶液中硫氰酸根的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)線性范圍內(nèi)。試樣待測(cè)液響應(yīng)值若超出標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍，應(yīng)稀釋后進(jìn)行分析。
6 結(jié)果計(jì)算
試樣中硫氰酸根的含量按式（1）計(jì)算獲得：
X=C×V×f/m
式中：
X — 試樣中硫氰酸根的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；
C — 試樣中硫氰酸根峰面積對(duì)應(yīng)的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；
V — 試樣定容體積，單位為毫升（mL）；
m — 試樣的量，單位為克（g）；
f — 稀釋倍數(shù)。
計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。
7 精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。
8 其他
按5.1樣品前處理中的稱(chēng)樣量和處理方法檢測(cè)時(shí)，液體乳中硫氰酸根檢出限為0.25 mg/kg，定量限為0.75 mg/kg；乳粉中硫氰酸根檢出限為1.0 mg/kg，定量限為3.0 mg/kg；奶酪、奶油等乳制品中硫氰酸根檢出限為2.0 mg/kg，定量限為6.0 mg/kg。
附錄 A
硫氰酸根離子標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖
圖A.1 0.2mg/L硫氰酸根離子標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖
