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嘉峪檢測網 2020-10-23 16:32
今日，為推進特殊注射劑化學仿制藥的研究與開發，在國家藥品監督管理局的部署下，藥審中心組織制定了《鹽酸多柔比星脂質體注射液仿制藥研究技術指導原則（試行）》和《注射用紫杉醇（白蛋白結合型）仿制藥研究技術指導原則（試行）》。根據《國家藥監局綜合司關于印發藥品技術指導原則發布程序的通知》（藥監綜藥管〔2020〕9號）要求，經國家藥品監督管理局審核同意，現予發布，自發布之日起施行。《鹽酸多柔比星脂質體注射液仿制藥研究技術指導原則（試行）》全文如下：
鹽酸多柔比星脂質體注射液仿制藥研究技術指導原則（試行）
一、概述
鹽酸多柔比星脂質體注射液是將鹽酸多柔比星包裹于脂質體內形成的特殊注射劑。
本指導原則根據采用硫酸銨梯度法制備的鹽酸多柔比星脂質體注射液的制劑特點，提出仿制藥開發過程中藥學研究、非臨床研究和生物等效性研究的技術要求，旨在為該仿制藥的研發提供技術指導。
本指導原則僅代表藥品監管部門目前對于本品的觀點和認識。在符合現行法規的要求下，可采用替代的研究方法，建議提供詳細的研究資料或與監管機構進行溝通。
二、整體研究思路
作為仿制藥，應當按照國家局發布的《化學仿制藥參比制劑遴選與確定程序》選擇參比制劑。
鹽酸多柔比星脂質體注射液為經靜脈注射給藥的脂質體制劑，應基于產品特征，采取逐步遞進的對比研究策略，首先進行仿制藥與參比制劑藥學和非臨床的全面對比研究；然后進行人體生物等效性研究；必要時進行臨床研究。若藥學研究和（或）非臨床研究結果提示仿制藥與參比制劑不一致，申請人應考慮對受試制劑處方工藝進一步優化后重新開展研究1。
作為注射劑仿制藥，除滿足仿制藥注冊申報的要求外，還應符合《化學藥品注射劑仿制藥質量和療效一致性評價技術要求》、《化學藥品注射劑仿制藥（特殊注射劑）質量和療效一致性評價技術要求》等。
三、技術要求
（一）藥學研究
1.處方
仿制藥的輔料種類和用量通常應與參比制劑（RLD）相同。輔料的用量相同是指仿制藥輔料用量為參比制劑相應輔料用量的95%—105%2。
氫化大豆磷脂酰膽堿（HSPC）、膽固醇、培化磷脂酰乙醇胺（MPEG-DSPE）是本品的關鍵成分，應按相關要求進行登記和關聯，或由制劑注冊申請人一并提供研究資料3。仿制藥應與參比制劑選擇相同來源（天然的或合成的）的脂質輔料，制定嚴格的內控標準，并提供研究資料證明仿制藥所采用的脂質輔料與參比制劑中的脂質輔料相似（如，各組分比例）。
2.制備工藝
采用硫酸銨梯度法制備的主要步驟包括：1）空白脂質體的制備，2）硫酸銨梯度的形成，3）活性藥物的裝載。活性藥物的裝載是多柔比星在脂質體內外相的硫酸銨濃度梯度驅動下擴散到空白脂質體內完成的4。
本品工藝較為復雜，應提供詳細的生產工藝開發研究資料和工藝驗證資料（包括無菌工藝驗證資料）。建議制定合理的生產過程控制策略，如關鍵步驟的生產時限、關鍵中間體的質量控制標準和保持時限等。
應特別關注生產工藝和批量對產品質量可控性的影響，注冊批和商業批的生產工藝及批量原則上應保持一致5。
3.質量研究
仿制藥應通過體外表征證明其與參比制劑關鍵質量屬性（CQAs）一致，除注射劑一般質量屬性外，還應關注以下CQAs9：
（1）脂質體組成：包括磷脂含量、游離的和包封的藥物含量、總硫酸根和NH4+濃度、內相中硫酸根和NH4+濃度、組氨酸濃度和蔗糖濃度，應選擇適當的方法進行研究并計算藥脂比。仿制藥各項指標應與參比制劑一致。
（2）包封藥物的狀態：藥物主要以多柔比星硫酸鹽沉淀的形式存在于脂質體內，應選擇適當的方法進行研究（如，電鏡法和X射線衍射法等），仿制藥應與參比制劑一致。
（3）脂質體內環境：包括內相體積、內外相pH梯度差、內相中硫酸根和NH4+濃度，應選擇適當的方法進行研究，仿制藥各項指標應與參比制劑一致。
（4）體外釋放度：體外釋放度是本品的重要質控指標，應選擇適當的條件和方法進行研究（如，FDA溶出度數據庫方法）6，仿制藥應與參比制劑一致。
（5）脂質體形態和脂膜層數：脂質體的載藥量和釋放度可能受脂質體形態和脂膜層數的影響，應選擇適當的方法進行研究（如，電鏡法等），仿制藥應與參比制劑一致。
（6）脂膜的相變溫度：脂膜的相變溫度影響脂質體雙層膜的穩定性，應選擇適當的方法進行研究（如，差示掃描量熱法等），仿制藥應與參比制劑一致。
（7）粒度和粒度分布：粒度和粒度分布是本品的重要質控指標。應選擇適當的方法進行研究，仿制藥的粒度分布（D10、D50、D90）應與參比制劑一致；建議基于D50和SPAN[(D90-D10)/D50]或多分散系數，采用群體生物等效性研究的分析方法進行粒度和粒度分布的對比（仿制藥和參比制劑各選三批，每批不少于10瓶，每瓶平行測定不少于3次），仿制藥與參比制劑應等效。
（8）PEG厚度（脂質體表面PEG密度）：采用甲氧基聚乙二醇（MPEG）對磷脂酰乙醇胺（DSPE）進行修飾，一方面可增加脂膜的機械強度；另一方面可避免脂質體被單核吞噬細胞系統（MPS）清除，以增加其在血液中的循環時間。應選擇適當的方法進行研究，仿制藥應與參比制劑一致。
（9）Zeta電位：表面電荷可維持脂質體的穩定性，同時影響脂質體的組織分布、細胞攝取和清除，應選擇適當的方法和介質進行研究，仿制藥應與參比制劑一致。
（10）多種條件下的體外泄漏：為保證腫瘤細胞的等效藥物傳遞，應模擬體內環境條件進行藥物泄漏的研究，推薦的試驗條件見下表：
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體外藥物泄漏條件 |
目的 |
建議理由 |
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在37攝氏度、50%人血漿中24小時 |
評價血液循環中脂質體的穩定性 |
血漿可模擬血液情況 |
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在37攝氏度，pH值5.5、6.5和7.5緩沖液中24小時 |
模擬正常組織、癌細胞周圍或癌細胞內藥物的釋放 |
正常組織：pH值7.3 癌組織：pH值6.6 癌細胞內部（內涵體和溶酶體）：pH 5-6（內涵體和溶酶體可能參與腫瘤細胞攝取脂質體和誘導藥物釋放） |
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在一定溫度范圍內（43、47、52、57攝氏度），在pH 6.5的緩沖液中12小時，或直至完全釋放 |
評價的脂膜完整性 |
脂膜的相變溫度（Tm）由脂質雙層性質決定（如，剛性、剛度和化學組成等）。不同溫度（低于或高于Tm）下藥物釋放的差異將反映脂質雙層性質的細微差異。 |
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在37攝氏度低頻（20 kHz）超聲2小時或直至完全釋放 |
評價脂質體中藥物的包封狀態 |
低頻超聲（20 kHz）通過短暫引入孔狀缺陷破壞脂質雙分子層，使脂質體內的多柔比星硫酸鹽沉淀溶解釋放多柔比星。 |
應提供各項對比研究所采用的分析方法和必要的方法學驗證資料，明確評價指標、標準及確定依據。
建議采用至少三批商業化規模工藝生產的仿制品與多批參比制劑進行體外對比研究。
4.穩定性研究
應進行常規穩定性考察，并結合產品說明書開展使用中產品穩定性研究。穩定性考察指標除普通注射劑CQAs外，還應包括微粒制劑相關的CQAs（如，包封藥物的狀態、體外釋放度、脂質體形態、粒度和粒度分布、Zeta電位等）。
應結合產品特點、穩定性、包材相容性和容器密封性等研究結果證明包材選擇合理。包材相容性應參照相關指導原則進行。
（二）非臨床研究
1.鹽酸多柔比星脂質體注射液是一種特殊注射劑，進入體內后存在釋藥的過程和體液成分的吸附等，因此仿制藥與參比制劑處方和工藝的差異可能導致藥物體內藥代動力學行為發生改變，從而帶來有效性和安全性的變化，建議在臨床試驗前開展仿制藥與參比制劑比較的藥代動力學研究，充分提示仿制藥與參比制劑在藥代動力學行為的一致性。
通常選擇非嚙齒類動物進行藥代動力學比較研究。采用擬定臨床劑量和給藥途徑，設置參比制劑組，測定血漿中總多柔比星含量和游離的多柔比星濃度，獲得t1/2、Cmax、AUC、Vz、Cl、MRT等主要藥代參數的比較研究結果。鑒于通常只有釋放藥物才能在體內發揮活性，在進行血藥濃度測定時需分別考察結合型藥物和釋放藥物的暴露量。
2.采用荷瘤動物開展組織分布的比較研究，劑量通常設置為有效劑量，至少測定給藥后血液、腫瘤組織、心臟和內質網較為豐富的組織（如肝、腎）的藥物濃度，比較正常組織和腫瘤組織與血液中的多柔比星藥物暴露量及其比值的差異，同時設置參比制劑組，比較仿制藥與參比制劑在體內主要組織分布的差異。
3.開展制劑安全性試驗，并與參比制劑比較。
（三）人體生物等效性研究1,7,8,9,10
研究類型：以藥代動力學（PK）為終點的生物等效性研究，空腹試驗。如果病人的健康狀況不允許禁食，申辦者可在研究期間提供非高脂餐，或可在標準（非高脂餐）早餐2小時后開始治療。
研究設計：通常推薦采用單次給藥、隨機、交叉研究設計。
受試者：適合本品單藥治療的腫瘤患者。
注意事項：
a.應使用商業批的樣品進行關鍵的生物等效性研究。
b.該研究將在安排患者接受常規治療的兩天內進行，兩個研究周期不得改變治療方案。
c.由于本品的心臟毒性，應在基線時記錄患者的心臟狀態。
d.在研究過程中，患者的體重改變導致給藥劑量改變達到±5%者，必須停止該患者的研究，并且該受試者的數據不納入最終BES進行生物等效性分析。
e.在仿制藥生物等效性研究的兩個周期中，合并用藥應盡可能保持一致。若因不良事件的治療需要，確需用藥導致兩周期間合并用藥不一致，應提供充分證據證明合并用藥對研究制劑藥代動力學行為不產生影響，否則該周期數據不納入最終BES進行生物等效性分析。
排除標準：
f.經過4個療程多柔比星治療的患者，多柔比星總暴露達到550mg/m2或更多。
g.肝功能明顯受損的患者。
h.對鹽酸多柔比星處方成分或RLD處方成分有過敏史的患者。
i.妊娠期和哺乳期的女性患者。
m.年齡小于18歲或大于75周歲的患者。
n.具有需要全身用藥的持續或活動性感染者。
o.有嚴重的心臟、肝臟或腎臟疾病的患者。
檢測物質：在適當的生物體液中游離的（非包封的）多柔比星和脂質體包封的多柔比星。
生物等效性評價指標：主要評價指標應提供包括受試制劑和參比制劑游離的和脂質體包封的多柔比星的AUC0-t、AUC0-∞、Cmax，需提供相應幾何均值、幾何均值比值及其90%置信區間。建議增加脂質體包封的多柔比星的部分暴露量指標（如AUC0-48h和AUC48h-last）作為次要評價指標，同樣進行90%置信區間考察。
生物等效的接受標準（90% CI）：游離的和脂質體包封的多柔比星的AUC0-t、AUC0-∞、Cmax幾何均值比值的90%置信區間數值應不低于80.00%，且不超過125.00%。對于脂質體包封的多柔比星的部分暴露量指標（如AUC0-48h和AUC48h-last），若等效性結論與主要評價指標的不一致，需充分分析原因以及對臨床用藥安全有效性的影響。
其他：注冊申報時，除了上述藥代動力學參數之外，還需提供其他全面的藥代動力學參數的個體和平均值，包括但不限于達峰時間、消除半衰期、清除率、表觀分布容積等。
四、參考文獻
1.國家藥品監督管理局藥品審評中心. 《化學藥品注射劑（特殊注射劑）仿制藥質量和療效一致性評價技術要求》（2020年5月）
2.國家藥品監督管理局藥品審評中心. 《化學藥品注射劑仿制藥質量和療效一致性評價技術要求》（2020年5月）
3.《國家藥監局關于進一步完善藥品關聯審評審批和監管工作有關事宜的公告》（2019年第56號）
4.A. Gabizon, H. Sheemda, Y. Barenholz. Pharmacokinetics of pegylated liposome doxorubicin: review of animal and human studies. Clin Pharmcokinet 42(5): 419-436 (2003)
5.國家藥品監督管理局藥品審評中心. 《化學仿制藥注冊批生產規模的一般性要求（試行）》（2018年6月）
6. FDA-Recommended Dissolution Methods Web site, http://www.accessdata.fda.gov/scripts/cder/dissolution/.
7.（原）國家食品藥品監督管理總局. 《以藥動學參數為終點評價指標的化學藥物仿制藥人體生物等效性研究技術指導原則》（2016年第61號通告）
8. 國家藥品監督管理局藥品審評中心. 《生物等效性研究的統計學指導原則》（2018年10月）
9.Food and Drug Administration. Draft Guidance on Doxorubicin Hydrochloride. Recommended Feb 2010; Revised Nov 2013, Dec 2014, Apr 2017, Sept 2018
10. European Medicines Agency. Pegylated liposomal doxorubicin hydrochloride concentrate for solution 2 mg/ml product-specific bioequivalence guidance. 1 July 2019, EMA/CHMP/800775/2017
來源：國家藥監局
