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嘉峪檢測(cè)網(wǎng) 2024-06-24 20:20
摘 要： 建立一種檢測(cè)降血壓、降血脂和降血糖類保健食品中58種非法添加藥物的高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜分析方法。樣品經(jīng)酸化乙腈提取，采用基于QuEChERS原則的快速凈化技術(shù)，以0.1%甲酸-5 mmol/L甲酸銨水溶液和甲醇-乙腈（體積比為1∶1）為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng)ESI正模式掃描，建立了包括58種藥物的結(jié)構(gòu)信息、一級(jí)/二級(jí)精確質(zhì)量數(shù)等在內(nèi)的數(shù)據(jù)譜庫(kù)，用于未知樣品二級(jí)質(zhì)譜圖自動(dòng)匹配確證。保健食品中58種非法添加物可同時(shí)進(jìn)行定性及定量檢測(cè)，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)不小于0.999 0，檢出限為0.01～10 ng/mL，定量限為0.03～30 ng/mL。平均回收率為64.25%～115.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1%～17.85%（n=6）。該方法樣品處理簡(jiǎn)單，靈敏度高，特異性強(qiáng)，可為保健品中降三高類非法添加物質(zhì)的高通量篩查確證提供方法參考。
關(guān)鍵詞： 高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜法； 降血壓； 降血脂； 降血糖； 非法添加； 保健食品
高血壓、高血糖和血脂異常是慢性心血管疾病(CVD)的主要危險(xiǎn)因素[1?2]，我國(guó)面臨人口老齡化問(wèn)題，CVD的發(fā)病率逐漸升高，降三高成為我國(guó)公共衛(wèi)生政策的重點(diǎn)[3?4]。高血壓及代謝異常通常會(huì)合并存在，比如高血壓患者合并血脂異常、胰島素抵抗、肥胖等，這些疾病獨(dú)立或聚集可導(dǎo)致腦卒中等較為嚴(yán)重的心血管疾病[5?6]。心血管疾病的治療需要長(zhǎng)期穩(wěn)定服用藥物甚至需要聯(lián)合用藥[7?8]，許多患者對(duì)此具有抵觸心理，加之保健食品行業(yè)日漸興起，越來(lái)越多的人更傾向于所謂的無(wú)副作用輔助降三高的保健食品。然而部分不法廠商在保健食品中借機(jī)添加違法的化學(xué)藥物[9]，增加了患者服用藥物劑量和服用種類的不確定性和隨機(jī)性，由此帶來(lái)的一系列不良反應(yīng)，輕則損傷臟器，重則危及生命[10?11]。為保證保健食品安全生產(chǎn)和質(zhì)量控制，除了要有相關(guān)法律文件作為監(jiān)管依據(jù)外，還要求具有靈敏快速的檢測(cè)方法。目前保健食品中非法添加檢測(cè)方法主要有紅外光譜或紫外分光光度法[12?14]、薄層色譜法[15?16]、液相色譜法[17?19]、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[20?22]、電化學(xué)方法[23]、離子遷移譜[24?25]等。然而降三高類藥物種類繁多，這些方法對(duì)保健食品基質(zhì)中化學(xué)藥物的檢測(cè)并不全面且精確度較低，筆者通過(guò)對(duì)茶劑、軟膠囊劑、硬膠囊等6種保健食品樣品劑型進(jìn)行處理優(yōu)化，利用高分辨質(zhì)譜的高分辨率、高靈敏的特性建立了以精準(zhǔn)質(zhì)量數(shù)、二級(jí)譜圖為基礎(chǔ)的保健食品中非法添加的58種降三高類藥物的高效液相色譜-高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜(HPLC-TOF/MS)檢測(cè)方法，可為保健食品中降三高類非法添加物的監(jiān)管提供技術(shù)支持。
1、 實(shí)驗(yàn)部分
1.1 主要儀器與試劑
飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜儀：Trilpe TOF 5600+系統(tǒng)，美國(guó)AB SCIEX公司。
液相色譜儀：20A型，日本島津公司。
超純水器：ElixMilli-Q型，美國(guó)密理博公司。
超聲波清洗器：kq-600型，中國(guó)昆山市超聲儀器有限責(zé)任公司。
電子分析天平：AL204型，感量為0.001 mg，瑞士梅特勒-托利多公司。
渦旋混勻器：Vortex-Genie型，美國(guó)科學(xué)產(chǎn)業(yè)公司。
色譜柱：Kinetex F5型，美國(guó)飛諾美公司。
高速冷凍離心機(jī)：美國(guó)貝克曼公司。
有機(jī)相微孔濾膜：0.22 μm，美國(guó)沃特世公司。
甲醇、乙腈、正己烷：色譜純，美國(guó)賽默飛世爾科技公司。
甲酸：優(yōu)級(jí)純，美國(guó)ROE scientific inc公司。
甲酸銨：分析純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所。
N-丙基乙二胺(PSA)、十八烷基二氧化硅(C18)和石墨化炭黑(GCB)：分析純，天津博納艾杰爾科技有限公司。
無(wú)水硫酸鎂：分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
氯化鈉：分析純，天津市博迪化工股份有限公司。
檸檬酸鈉：分析純，天津市申泰化學(xué)試劑有限公司。
混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：(1) 甲醇中6種藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，利多卡因、鹽酸可樂(lè)定、鹽酸美西律、鹽酸普羅帕酮、鹽酸維拉帕米、利血平的質(zhì)量濃度均為10 μg/mL；(2) 甲醇中11種降壓類藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，阿替洛爾、鹽酸可樂(lè)定、卡托普利、哌唑嗪、利血平、硝苯地平、氨氯地平、尼群地平、尼莫地平、非洛地平、氫氯噻嗪的質(zhì)量濃度均為100 μg/mL；(3) 甲醇中15種藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，比索洛爾、艾司洛爾、布曲嗪、苯乙雙胍、福莫特羅、酚妥拉明、瑞舒伐他汀鈣、洛沙坦、沙美特羅、替寧酸、吲哚洛爾、伊拉地平、伊索唑胺、磷酸苯丙哌林、苯乙醇胺A的質(zhì)量濃度均為50 μg/mL；(4) 乙腈中5種藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，坎利酮、鹽酸馬布特羅、培哚普利、瑞格列奈、西地那非的質(zhì)量濃度均為50 μg/mL；(5) 乙腈中洛非西定標(biāo)準(zhǔn)溶液，100 μg/mL；(6) 乙腈中地爾硫卓標(biāo)準(zhǔn)溶液，100 μg/mL；(7) 甲醇中13種藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，鹽酸克倫潘特、卡維地洛、磷酸利美尼定、N-乙酰-2-芐基色胺、溴布特羅、硫酸異丙喘寧、二羥丙茶堿、菲諾特羅、利多氟嗪、鹽酸吡格列酮、羥甲基克倫特羅、阿西莫司、阿佐塞米的質(zhì)量濃度均為50 μg/mL；(8) 乙腈中4種藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，辛伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀、去羥基洛伐他汀的質(zhì)量濃度均為100 μg/mL；(9) 甲醇中21種降糖藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，其中達(dá)格列凈、坎格列凈、曲格列酮、環(huán)格列酮的質(zhì)量濃度均為50 μg/mL，西他列汀、甲苯磺丁脲、妥拉磺丁脲、維達(dá)列汀、格列波脲、那格列奈、格列喹酮、莫格他唑、鹽酸吡格列酮、羅格列酮、氯磺丙脲、格列吡嗪、醋磺己脲、瑞格列奈、格列苯脲、格列美脲、卡達(dá)林的質(zhì)量濃度均為1 μg/mL；(10) 甲醇中13種降糖藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，甲苯磺丁脲、格列苯脲、格列齊特、格列吡嗪、格列喹酮、格列美脲、馬來(lái)酸羅格列酮、瑞格列奈、鹽酸吡格列酮、鹽酸二甲雙胍、鹽酸苯乙雙胍、鹽酸丁二胍、格列波脲的質(zhì)量濃度均為100 μg/mL；天津阿爾塔科技有限公司。
保健食品樣品：委托檢測(cè)樣品。
實(shí)驗(yàn)用水為超純水，由ElixMilli-Q型超純水器過(guò)濾而得。
1.2 溶液配制
41種藥物混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別取甲醇中6種藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5 mL，甲醇中15種藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液、乙腈中5種藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液、甲醇中13種藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液、甲醇中21種降糖藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液各0.1 mL，甲醇中11種降壓類藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液、乙腈中洛非西定標(biāo)準(zhǔn)溶液、乙腈中地爾硫卓標(biāo)準(zhǔn)溶液、乙腈中4種藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液、甲醇中13種降糖藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液各0.05 mL，配制成41種藥物質(zhì)量濃度均為500 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。
17種藥物混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：取甲醇中21種降糖藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，將其中質(zhì)量濃度為1 μg/mL的17種藥物配制成質(zhì)量濃度均為500 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。
58種藥物系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：以0.1%甲酸溶液為稀釋劑，將上述兩種混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制成58種藥物的質(zhì)量濃度均分別為0.001、0.01、0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、20、50、100、200、500 ng/mL的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
0.5%酸化乙腈溶液：取500 μL甲酸，用乙腈定容至100 mL，得到體積分?jǐn)?shù)為0.5%酸化乙腈溶液。
空白樣品溶液：將空白樣品按照樣品處理程序處理，得空白樣品溶液。
加標(biāo)樣品溶液：向空白樣品中加入58種物質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，并依照樣品處理程序處理，得到各藥物添加水平均為50 ng/mL的加標(biāo)樣品溶液。
1.3 樣品處理
1.3.1 提取
液體劑(養(yǎng)生酒)：準(zhǔn)確量取0.5 g樣品，用酸化乙腈-水(體積比為9∶1)溶液定容至10 mL，混合均勻，以10 000 r/min轉(zhuǎn)速離心3 min，得上清液待凈化。
固體劑(代用茶、滴丸、硬膠囊、壓片)：準(zhǔn)確稱取0.5 g經(jīng)研磨的固體樣品，加入1 mL水浸泡10 min，加入9 mL酸化乙腈，渦旋混勻，超聲提取10 min，加入1 g MgSO4、0.9 g NaCl、0.2 g Na3C6H5O7，渦旋混勻，以10 000 r/min轉(zhuǎn)速離心3 min，上清液待凈化。
油劑(軟膠囊)：準(zhǔn)確稱取0.5 g樣品，加入2 mL飽和酸化乙腈正己烷，渦旋使其溶解，加入10 mL飽和正己烷酸化乙腈提取，渦旋混勻，以10 000 r/min轉(zhuǎn)速離心3 min，取乙腈層待凈化。
1.3.2 凈化
取1 mL提取液至2 mL EP管中，加入20 mg PSA、20 mg C18、2 mg GCB，渦旋振蕩2 min，以10 000 r/min轉(zhuǎn)速離心3 min，取上層清液，經(jīng)0.2 μm濾膜得濾液，作為樣品凈化液。
1.4 儀器工作條件
1.4.1 色譜儀
色譜柱：Kinetex F5柱(3.0 mm×100 mm，2.6 μm，美國(guó)飛諾美公司)；流動(dòng)相：A相為0.1%甲酸-5 mmol/L甲酸銨水溶液，B相為甲醇-乙腈(體積比為1∶1)溶液，流量為0.25 mL/min；洗脫方式：梯度洗脫，洗脫程序見(jiàn)表1；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣體積：10 μL。
表1 梯度洗脫程序
Tab. 1 Program of gradient elution
注：A—0.1%甲酸-5 mmol/L甲酸銨水溶液，B—甲醇-乙腈（體積比為1∶1）溶液。
1.4.2 質(zhì)譜儀
離子源：電噴霧電離(ESI)源；掃描方式：正離子掃描；離子源溫度：550 ℃；噴霧電壓：5 500 V；一級(jí)掃描模式：質(zhì)譜掃描范圍(TOF)為m/z 100～1 200，去簇電壓為60 V，碰撞能量為10 eV；二級(jí)掃描模式(IDA-MS/MS)：掃描范圍(IDA)為m/z 50～1 200，去簇電壓為60 V，碰撞能量為20～60 eV；氣簾氣(CUR)壓力：241 kPa；霧化氣(GAS1)壓力：379 kPa；輔助加熱氣壓力(GAS2)：379 kPa。根據(jù)各類物質(zhì)結(jié)構(gòu)特征，選擇正離子模式，除達(dá)格列凈和坎格列凈在正離子模式下形成[M+NH4]+準(zhǔn)分子離子峰，其余物質(zhì)均形成[M+H]+準(zhǔn)分子離子峰。58種違禁降三高藥物的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表2。
表2 58種降三高藥物信息及質(zhì)譜參數(shù)
Tab. 2 Information and mass spectrometry parameters of 58 drugs for reducing three highs
注：編號(hào)1～29為降壓類藥物；編號(hào)30～34為降脂類藥物；編號(hào)35～58為降糖類藥物。
1.5 定性定量數(shù)據(jù)庫(kù)建立
利用HPLC-TOF/MS技術(shù)與SCIEX-OS-Q軟件，建立包括58種常見(jiàn)降三高類物質(zhì)的一級(jí)、二級(jí)譜圖數(shù)據(jù)庫(kù)，建立快速定性、定量篩查方法。在實(shí)際樣品篩查時(shí)，不使用標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，直接利用一級(jí)精準(zhǔn)質(zhì)量數(shù)據(jù)庫(kù)和二級(jí)碎片離子譜庫(kù)進(jìn)行初步定性和定量篩查，實(shí)現(xiàn)快速高通量篩查。
1.6 樣品測(cè)定
準(zhǔn)確稱取各類劑型樣品0.5 g，按照1.3方法進(jìn)行樣品處理，溶液稀釋至1 000倍體積，過(guò)0.2 μm濾膜得濾液，在1.4儀器工作條件下測(cè)定，利用一級(jí)、二級(jí)譜圖數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行定性和定量。
2、 結(jié)果與討論
2.1 提取條件優(yōu)化
參考國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)SN/T 5357—2021《出口保健食品中多類非法添加物的測(cè)定 液相色譜—質(zhì)譜/質(zhì)譜法》對(duì)樣品處理過(guò)程進(jìn)行優(yōu)化，由于提取劑等試劑對(duì)不同劑型樣品的影響差別不大，所以主要以茶劑(固體劑)為例進(jìn)行樣品處理方法的優(yōu)化。
2.1.1 提取溶劑選擇
用甲酸對(duì)甲醇和乙腈進(jìn)行酸化，甲酸體積分?jǐn)?shù)均為0.5%，對(duì)比酸化甲醇和酸化乙腈作為提取劑時(shí)各目標(biāo)物回收率情況。每種提取劑設(shè)置3次平行試驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.32%～14.55%，兩種提取劑的提取效率如圖1所示。由圖1可以看出，以酸化乙腈作為提取劑時(shí)各物質(zhì)回收率較好。
圖1 不同提取溶劑時(shí)茶劑中58種藥物的提取效率
Fig. 1 Extraction efficiency of 58 drugs in tea preparations at different extraction solvents
從整體來(lái)看，乙腈的提取效率優(yōu)于甲醇，所以，在對(duì)液體劑和油劑類樣品進(jìn)行提取時(shí)，也使用乙腈進(jìn)行提取。液體劑類樣品使用0.5%酸化乙腈-水(體積比為9∶1)進(jìn)行提取；油劑類樣品用正己烷與0.5%酸化乙腈互為飽和的溶液(正己烷與0.5%酸化乙腈體積比為1∶5)，將上層飽和酸化乙腈正己烷作為除油劑，將下層飽和正己烷酸化乙腈作為的提取劑。
2.1.2 鹽析劑用量選擇
固體樣品提取時(shí)選用無(wú)水MgSO4、NaCl和Na3C6H5O7作為鹽析劑，無(wú)水MgSO4可除去有機(jī)相中的水，并且可萃取出極性雜質(zhì)干擾物，如糖類等；NaCl和Na3C6H5O7可控制提取劑極性，但不易過(guò)量[26?27]。對(duì)加標(biāo)茶劑樣品進(jìn)行試驗(yàn)考察，當(dāng)MgSO4、NaCl和Na3C6H5O7加入量分別為2、0.5、0.5 g和1、0.2、0.2 g時(shí)對(duì)比各目標(biāo)物的回收率。不同鹽析劑加入量設(shè)置3次平行試驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.51%～14.69%，鹽析劑不同用量時(shí)的提取效率如圖2所示。由圖2可以看出，當(dāng)鹽析劑MgSO4、NaCl、Na3C6H5O7加入質(zhì)量分別為2、0.5、0.5 g時(shí)，有13種目標(biāo)物回收率明顯降低，分別是編號(hào)為1、2、3、4、6、7、11、20、21、25、33、40、57的目標(biāo)物，尤其是編號(hào)為7、57的目標(biāo)物，其回收率低于60%，因此確定鹽析劑MgSO4、NaCl、Na3C6H5O7的用量分別為1、0.2、0.2 g。
圖2 鹽析劑不同用量時(shí)茶劑中58種藥物的提取效率
Fig. 2 Extraction efficiency of 58 drugs in tea preparations at different dosage of salting-out agent
2.1.3 除油劑用量選擇
軟膠囊樣品基質(zhì)主要成分是油脂，選擇飽和酸化乙腈正己烷作為除油劑，正己烷飽和酸化乙腈作為提取劑。對(duì)除油劑用量進(jìn)行優(yōu)化，對(duì)比除油劑用量分別為1 mL和2 mL時(shí)各藥物回收率，兩種加入量設(shè)置3次平行試驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.41%～14.64%，除油劑不同用量時(shí)的提取效率如圖3所示。由圖3可以看出，當(dāng)除油劑用量為1 mL時(shí)，有20種目標(biāo)物的回收率明顯降低，分別是編號(hào)為2、4、5、6、7、8、9、11、13、18、19、22、26、44、48、50、55、56、57和58的目標(biāo)物，尤其是編號(hào)為8和50的目標(biāo)物，其回收率低于60%，因此確定除油劑用量為2 mL。
圖3 除油劑不同用量時(shí)油劑中58種藥物的提取效率
Fig. 3 Extraction efficiency of 58 drugs in oil agents at different dosages of degreasers
2.2 凈化技術(shù)優(yōu)化
由于部分保健食品基質(zhì)容易對(duì)待測(cè)物產(chǎn)生干擾，因此需要對(duì)樣品提取液進(jìn)行凈化。采用基于QuEChERS原則的樣品處理技術(shù)，選擇PSA、C18、GCB為吸附劑，PSA對(duì)極性物質(zhì)具有吸附作用，可去除糖類、有機(jī)酸等干擾；C18對(duì)非極性物質(zhì)具有吸附作用，可去除脂質(zhì)、固醇等干擾；GCB可有效去除色素等干擾，但影響平面結(jié)構(gòu)物質(zhì)的回收率[28?29]。分別考察3種吸附劑在不同用量時(shí)各藥物的回收率，3種吸附劑的用量分別為PSA：20、50、100 mg；C18：20、50、100 mg；GCB：0、2、5、10 mg，圖4～圖6分別為3種吸附劑不同用量時(shí)58種藥物的平均回收率。結(jié)果顯示，受PSA影響較大的有編號(hào)為8、19、20、24、52、56、58的目標(biāo)物；受C18影響較大的有編號(hào)為31、34、57、58的目標(biāo)物；受GCB影響較大的有編號(hào)為1、4、5、6、8、9、10、11、14、20、22、23、27、29、35、36、45、49、51、52、53的目標(biāo)物。綜合考慮，確定吸附劑PSA、C18、GCB的用量分別為20、20、2 mg。
圖4 PSA不同用量時(shí)58種目標(biāo)物的平均回收率
Fig. 4 Average recoveries of 58 target substances at different dosage of PSA
圖5 C18不同用量時(shí)58種目標(biāo)物的平均回收率
Fig. 5 Average recoveries of 58 target substances at different dosage of C18
圖6 GCB不同用量時(shí)58種目標(biāo)物的平均回收率
Fig. 6 Average recoveries of 58 target substances at different dosage of GCB
2.3 流動(dòng)相選擇
以混合標(biāo)準(zhǔn)溶液為分析對(duì)象，分別選擇4種流動(dòng)相體系進(jìn)行試驗(yàn)，(1) A相為0.1%甲酸-5 mmol/L甲酸銨溶液，B相為乙腈；(2) A相為0.1%甲酸-5 mmol/L甲酸銨溶液，B相為乙腈-0.1%甲酸-5 mmol/L甲酸銨溶液；(3) A相為0.1%甲酸-5 mmol/L甲酸銨溶液，B相為甲醇+乙腈(體積比為1∶1)溶液；(4) A相為0.1%甲酸溶液，B相為乙腈。結(jié)果表明，鹽酸可樂(lè)定在(1)、(3)流動(dòng)相體系中具有較好的峰形，在(2)、(4)流動(dòng)相體系中峰形變寬且前延峰明顯；阿替洛爾在4種流動(dòng)相中均出現(xiàn)雜峰，在(2)、(4)流動(dòng)相體系中于2 min之前出峰，在(4)流動(dòng)相體系中出現(xiàn)雙峰且均能匹配；甲苯磺丁脲在4種流動(dòng)相中均出現(xiàn)雜峰，但在(4)流動(dòng)相體系中有所改善且靈敏度提高；維達(dá)列汀在4種流動(dòng)相中均出現(xiàn)雜峰，在(2)、(4)流動(dòng)相體系中峰形變差且出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象；羅格列酮在4種流動(dòng)相中均出現(xiàn)雙峰且均能匹配；鹽酸二甲雙胍在4種流動(dòng)相中均出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，但(4)流動(dòng)相體系中峰形有所改善但靈敏度降低。總體來(lái)看絕大多數(shù)物質(zhì)在(3)流動(dòng)相體系中具有最高的靈敏度，且具有較好的峰形，故選擇(3)流動(dòng)相體系，即A相為0.1%甲酸溶液-5 mmol/L甲酸銨溶液，B相為甲醇-乙腈(體積比為1∶1)溶液。
2.4 色譜圖
混合標(biāo)準(zhǔn)溶液、空白樣品溶液加標(biāo)樣品溶液色譜圖如圖7～圖9所示。
圖7 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液提取離子色譜圖
Fig. 7 Extraction ion chromatogram of mixed standard solution
圖8 空白樣品溶液總離子流色譜圖
Fig. 8 Total ion current chromatogram of blank sample solution
圖9 加標(biāo)樣品溶液提取離子色譜圖
Fig. 9 Extraction of ion chromatogram of spiked sample solution
2.5 線性方程、檢出限和定量限
在1.4儀器工作條件下，分別測(cè)定58種藥物系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，以標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度x為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積y為縱坐標(biāo)，得到各目標(biāo)物的回歸方程。逐級(jí)稀釋58種藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別以3倍信噪比和10倍信噪比對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度作為方法檢出限和定量限。58種藥物質(zhì)量濃度線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限見(jiàn)表3。由表3可知，各目標(biāo)物線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999 0，58種藥物的檢出限為0.01～10 ng/mL，定量限為0.03～30 ng/mL。表明該方法具有較高的靈敏度。
表3 質(zhì)量濃度線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、方法檢出限和定量限
Tab. 3 Linear range of mass concentration、linear equation、correlation coefficient、method detection limit and quantitative limit
2.6 加標(biāo)回收與精密度試驗(yàn)
向空白樣品中加入58種藥物混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，使卡托普利、替寧酸、鹽酸丁二胍、氯磺丙脲、醋磺己脲的加標(biāo)質(zhì)量濃度均為25 ng/mL，其余藥物的加標(biāo)質(zhì)量濃度均為5 ng/mL，按照1.3樣品處理方法，平行處理6份樣品溶液，在1.4儀器工作條件下分別進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可知，58種目標(biāo)物加標(biāo)平均回收率為64.25%～115.3%；測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1%～17.85%，表明該方法準(zhǔn)確度、精密度均良好。
表4 加標(biāo)回收與精密度試驗(yàn)結(jié)果(n=6)
Tab. 4 Standard addition recoveries and precision test results (n=6) ( % )
注：卡托普利、替寧酸、鹽酸丁二胍、氯磺丙脲、醋磺己脲的加標(biāo)質(zhì)量濃度均為25 ng/mL，其余藥物的加標(biāo)質(zhì)量濃度均為5 ng/mL。
2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)
按1.3方法制備樣品溶液，分別在第0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定，各目標(biāo)物色譜峰面積測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.91%～8.95%，說(shuō)明各藥物樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
3、 結(jié)語(yǔ)
利用HPLC-TOF/MS聯(lián)用技術(shù)以及SCIEX-OS-Q分析軟件建立了針對(duì)降三高類保健食品中違禁添加成分的檢測(cè)方法，對(duì)6種劑型的常見(jiàn)保健食品樣品進(jìn)行優(yōu)化處理，對(duì)樣品提取液進(jìn)行凈化，在保證回收率的同時(shí)，有效降低雜質(zhì)干擾。通過(guò)精準(zhǔn)分子質(zhì)量數(shù)據(jù)庫(kù)和碎片離子譜庫(kù)的建立，實(shí)現(xiàn)快速、高精確度、更全面的物質(zhì)篩查，可在15 min內(nèi)同時(shí)對(duì)58種物質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析，有助于對(duì)保健食品違禁添加物的監(jiān)管與治理。為探究保健食品中更多降三高類藥物的非法添加，還需要不斷完善數(shù)據(jù)庫(kù)，以提供更好的技術(shù)支撐。
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