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嘉峪檢測網 2018-09-17 11:38
摘 要：目的：建立高效液相色譜法，用于鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液中脫羧莫西沙星的含量測定。方法：色譜柱為菲羅門Gemini-NX C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），以1%三乙胺溶液（用磷酸調節pH值至2.5）:甲醇=70:30為流動相；280 nm作為檢測波長；流速1.0 mL/min；柱溫40 ℃。結果：脫羧莫西沙星的進樣濃度在0.217 5～1.087 5 μg/mL（r=0.998 5）范圍內呈良好的線性關系；重復性、穩定性試驗的RSD均小于2.0%；平均回收率為102.79%，RSD為1.62%（n=9）。結論：該高效液相色譜法的準確度高、重復性好，可以用來測定鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液中脫羧莫西沙星的含量。
0 引言
鹽酸莫西沙星化學名為1-環丙基-7-{（S,S）-2,8-重氮-二環[4.3.0]壬-8-基}-6-氟-8-甲氧-1,4-二氫-4-氧-3-喹啉羧酸鹽酸鹽，是由德國拜耳公司研制的第4代氟喹諾酮類超廣譜抗生素，它保留了第3代抗革蘭陰性菌的活性，其8-甲氧基部分還提高了抗革蘭陽性菌的活性，特別是增加了對厭氧菌的抗菌活性，是具有抗菌活性的廣譜抗菌藥。莫西沙星的耐藥性使得對糖肽類、頭孢菌素類、青霉素類、四環素類和大環內酯類耐藥的機制不會影響莫西沙星的抗菌活性，莫西沙星與這些抗菌藥無交叉耐藥性，且至今未發現質粒介導的耐藥性出現。
現行版《美國藥典》中鹽酸莫西沙星的有關物質檢查采用ODS柱，用甲醇-磷酸鹽系統進行梯度洗脫，僅對雜質A、B、C、D、E等5個已知雜質進行了控制；《歐洲藥典》9.0版鹽酸莫西沙星的有關物質檢查采用的色譜柱為苯基柱，以甲醇-四丁基硫酸氫銨磷酸鹽緩沖液為流動相，同樣僅對上述5個已知雜質進行了控制；鹽酸莫西沙星國內現行標準（YBH01912013）中的有關物質檢查也采用了《歐洲藥典》9.0版鹽酸莫西沙星有關物質檢查的方法，對上述5個雜質以及雜質F進行了控制。
現根據鹽酸莫西沙星的合成工藝，對雜質譜進行解析，除了對可能存在的上述6個雜質進行研究外，新增了對降解雜質脫羧莫西沙星的研究，其化學結構式如圖1所示，提高了鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液質量標準。采用上述鹽酸莫西沙星有關物質檢測方法及多篇文獻報道的檢測方法進行測試，均不能有效測定脫羧莫西沙星含量。最終，通過參考鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液進口藥品注冊標準（JX20030036），對標準中的有關物質檢查方法進行了優化，從而建立了鹽酸莫西沙星中脫羧莫西沙星的含量測定方法，并經過詳細的方法學驗證，證明了所建立的方法準確度高、重復性好，可以用來測定鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液中脫羧莫西沙星的含量。
1 儀器與試藥
1.1 儀器
LC-20A型高效液相色譜儀，日本島津公司；CPA225D型電子天平，北京賽多利斯儀器系統有限公司；FE20型pH計，梅特勒-托利多公司。
1.2 試藥
雜質A對照品（批號：XM56-1023，純度99.90%）、雜質C對照品（批號：XM56-6738，純度99.13%）、雜質F對照品（批號：XM56-5520，純度99.88%），均來自HI-CHEMICAL；雜質B對照品（批號：17-M00022-05，純度99.2%）、雜質D對照品（批號：16-M00024-02，純度99.3%）、雜質E對照品（批號：15-M00025-12，純度97.5%），均來自RXA；脫羧莫西沙星對照品（批號：1672226M-HB-08，純度99.1%），深圳斯坦德化工科技有限公司；鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液（批號：17092901、17092902、17092903），山東齊都藥業有限公司；甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。
2 方法與結果
2.1 色譜條件與系統適用性
色譜柱：菲羅門Gemini-NXC18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：1%三乙胺溶液（用磷酸調節pH值至2.5）:甲醇=70:30；檢測波長：280 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：40 ℃；進樣量：10 μL。理論板數以脫羧莫西沙星峰計應不低于2 000。
2.2 溶液的制備
（1）溶劑：取無水亞硫酸鈉約0.050 g，加水約500 mL使其溶解，加入磷酸1 mL，用水稀釋至1 000 mL。
（2）空白輔料溶液：按鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液處方配制不含鹽酸莫西沙星的溶液，滅菌，作為空白輔料；再用溶劑稀釋兩倍，作為空白輔料溶液。
（3）對照品溶液：分別取雜質A、B、C、D、E、F與脫羧莫西沙星對照品適量，精密稱定，用溶劑制成每1 mL中含各雜質16 μg的溶液，作為對照品貯備液；從中精密量取1 mL，置于20 mL容量瓶中，用溶劑定容至刻度，搖勻，即得。
（4）系統適用性溶液：精密量取本品10 mL與對照品貯備液1 mL，置于20mL容量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得。
（5）供試品溶液：精密量取本品10 mL，置于20 mL容量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得。
2.3 專屬性考察
分別精密量取空白輔料溶液、對照品溶液、系統適用性溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果如圖2所示。空白輔料不干擾脫羧莫西沙星的含量測定，脫羧莫西沙星峰與相鄰峰分離度良好。結果表明：所建立的高效液相色譜法的專屬性良好。
圖2 專屬性試驗液相色譜圖
1—脫羧莫西沙星 2—雜質F 3—鹽酸莫西沙星
4—雜質A 5—雜質B 6—雜質C 7—雜質D 8—雜質E
2.4 強制降解試驗
取鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液（批號：17092901）適量，分別考察在酸、堿、氧化、高溫、光照條件下樣品的質量穩定情況，具體條件如表1所示。
表1 強制降解試驗條件
試驗結果表明：空白溶液不干擾脫羧莫西沙星含量的測定。鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液在酸、堿、高溫條件下，脫羧莫西沙星含量均有所升高；在氧化條件下，脫羧莫西沙星含量有所下降；在光照條件下，脫羧莫西沙星含量幾乎不變。
2.5 系統適用性試驗
取系統適用性溶液，進樣6次，記錄色譜圖。從色譜圖中可以看出，脫羧莫西沙星峰與相鄰峰之間的分離度及其理論板數、拖尾因子均符合要求。計算得到脫羧莫西沙星的峰面積RSD為0.68%。
結果表明：所建立的方法系統適用性良好。
2.6 檢測限和定量限
精密稱取脫羧莫西沙星對照品適量，用溶劑溶解并依次稀釋，分別取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。檢測限信噪比S/N=3，定量限信噪比S/N=10。脫羧莫西沙星的檢測限為0.065 2 μg/mL，定量限為0.217 5 μg/mL。
2.7 線性關系考察
精密稱取脫羧莫西沙星對照品適量，用溶劑溶解并分別制成定量限濃度不低于150%限度范圍內的系列線性溶液。分別精密量取10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得到線性回歸方程Y=42 913X-1 518.3（r=0.998 5）。
結果表明：脫羧莫西沙星在0.217 5～1.087 5 μg/mL進樣濃度范圍內，線性關系良好。
2.8 重復性試驗
按擬定的方法配制對照品溶液，再平行配制6份系統適用性溶液（作為重復性試驗供試品溶液1～6）。分別取上述溶液10 μL，依法進樣，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算脫羧莫西沙星的含量。6次測量結果顯示：脫羧莫西沙星的含量平均值為0.11%，6次結果的RSD為0.01%。
結果表明：所建立的方法重復性良好。
2.9 加樣回收率試驗
取“重復性試驗”項下的對照品溶液，再配制含脫羧莫西沙星限度的80%、100%、120% 3個不同濃度的供試品溶液各3份。分別取上述溶液10 μL，依法進樣，記錄色譜圖，計算脫羧莫西沙星的回收率結果，如表2所示。
表2 加樣回收率試驗
結果表明：平均回收率為102.79%，RSD為1.62%。
2.10 耐用性考察
2.10.1 溶液穩定性
按擬定的方法配制對照品溶液及系統適用性溶液（作為溶液穩定性試驗的供試品溶液），在室溫下放置24 h，分別于0 h、3 h、6 h、9 h、12 h、18 h、24 h精密量取10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
結果表明：對照品溶液與供試品溶液在室溫條件下放置24 h，脫羧莫西沙星峰面積的RSD分別為1.42%、0.79%，表明溶液穩定性良好。
2.10.2 色譜條件參數變化
將色譜條件參數柱溫（±3 ℃）、流速（±0.1 mL/min）、流動相比例（±2%）、流動相pH（±0.2）、色譜柱（不同批次）等進行微小的變動，以此評估其對脫羧莫西沙星含量測定結果的影響程度。
結果表明：當參數發生微小變動時，脫羧莫西沙星的含量測定結果幾乎不受影響，表明所建立的方法耐用性較好。
2.11 樣品測定
取中試規模的鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液樣品3批（批號：17092901、17092902、17092903），依法測定脫羧莫西沙星含量，結果如表3所示。
表3 樣品測定脫羧莫西沙星含量結果
3 結語
本文根據鹽酸莫西沙星雜質譜的解析，除對相關文獻已報道的雜質A、B、C、D、E、F進行控制外，新增了對降解雜質脫羧莫西沙星的研究，提高了鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液的質量標準。參考鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液進口藥品注冊標準而建立的鹽酸莫西沙星中脫羧莫西沙星的含量測定方法，經詳細全面的方法學研究證明，該方法測定的結果準確，重復性良好，可以用來測定鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液中脫羧莫西沙星的含量。
來源：AnyTesting
