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嘉峪檢測網 2025-03-17 16:57
本研究旨在建立一種同時測定婦科養(yǎng)榮丸（主要成分為當歸、川芎、杜仲、陳皮等）中綠原酸、京尼平苷酸、芍藥苷、阿魏酸、橙皮苷、松脂醇二葡萄糖苷含量的方法。采用的方法是通過甲醇提取液的分析，使用Eclipse XDB-C18色譜柱（450mm×4.6mm，5μm）進行分離；流動相為甲醇 -0.1%磷酸溶液，采用梯度洗脫；流速設定為1.0mL/min ；柱溫保持在30℃ ；進樣量為5μl；檢測波長為230nm。結果顯示，這6種成分在各自檢測范圍內均表現(xiàn)出良好的線性關系（相關系數(shù)r≥0.9995），平均加標回收率為98.71%，相對標準偏差（RSD）小于1.3%。因此，本研究所提出的分析方法準確可行，適用于婦科養(yǎng)榮丸（濃縮丸）的質量控制。
婦科養(yǎng)榮丸（濃縮丸）由當歸、酒白芍、熟地黃等十六味藥材制成，具有補養(yǎng)氣血，疏肝解郁，祛瘀調經等功效。它主要用于治療氣血不足、血漏血崩，貧血身弱及不孕癥 [1]。在臨床上，婦科養(yǎng)榮制劑也常用于更年期功能性子宮出血、原發(fā)性卵巢功能不全、不孕癥等疾病的聯(lián)合治療 [2-4]。原質量標準收錄于《中藥成方制劑》第十五冊，該標準僅規(guī)定了顯微鑒別；現(xiàn)收載于《中國藥典》2020 版一部，增加了當歸、川芎等薄層色譜鑒別，并對芍藥苷含量進行了測定，規(guī)定每 1g 含白芍以芍藥苷計，不得少于 0.80 mg。在質量標準中，檢驗項目單一化，難以全面把控制劑的整體質量。目前，關于芍藥苷、橙皮苷等指標性成分評價婦科養(yǎng)榮丸（濃縮丸）質量的研究已有相關報道 [5-8]，但這些報道尚不夠全面。通過資料檢索發(fā)現(xiàn)，當歸、川芎、白芍、杜仲等藥材均具有相應的含量指標性成分。近年來，一測多評作為快速發(fā)展的中藥質量控制方法，因具備科學、準確、應用范圍廣、可操作性強等優(yōu)點，在傳統(tǒng)中藥復方制劑中得到了廣泛應用 [9-18]。因此，本文采用高效液相色譜（HPLC）法對婦科養(yǎng)榮丸（濃縮丸）的質量進行研究，旨在為婦科養(yǎng)榮丸的整體質量控制提供科學參考。
1.材 料
1.1儀器
Agilent 1260 型高效液相色譜儀，配備DAD檢測器（Agilent公司）；AUY220 型電子天平（精度達萬分之一，日本島津電子天平）；CPA225D 型電子天平（精度達十萬分之一，德國賽多利斯）；以及 KQ-500VDE 三頻數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。
1.2試藥
對照品包括：京尼平苷酸（批號111828-201805，純度 98.1%）、綠原酸（批號 110753-202119，純度 96.3%）、芍藥苷（批號 110736-202145，純度94.6%）、 松脂醇二葡萄糖苷（ 批號111537-201706，純度 91.7%）、阿魏酸（批號 110773-201915，純度 99.4%）以及橙皮苷（批號 110721-202019，純度95.3%）。來源：中國食品藥品檢定研究院；婦科養(yǎng)榮丸 [仲景宛西制藥股份有限公司，批號分別為 20031、20032、20033、20034、20035、20036，規(guī)格為每瓶200丸（每 8 丸相當于原生藥3g）] ；實驗中使用的溶劑為色譜級甲醇和超純水，其他試劑均為分析級。
2.方法與結果
2.1色譜條件
色譜柱：Eclipse XDB-C18 柱（450 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇（A）與 0.1% 磷酸溶液（B）進行梯度洗脫；0-5 min，5%A；5-10 min，5%-15%A；10-17 min，15%-22%A；17-18 min，22%-25%A；18-25 min，25%A；25-28 min，25%-27.8%A；28-40 min，27.8%-32%A；40-55 min，32%-55%A；55-60 min，55%-90%A；60-70 min；90%A；波長為230 nm；柱溫：30℃；流速為1.0 ml/min；進樣量：5 μl。
2.2溶液制備
2.2.1 對照品溶液配制
取適量對照品，進行精密稱定后，加甲醇溶解并搖勻，制得京尼平苷酸、綠原酸、芍藥苷、松脂醇二葡萄糖苷、阿魏酸、橙皮苷的對照品貯備液，其質量濃度分別為 0.05480 mg/ml、0.16132 mg/ml、0.25840 mg/ml、0.07484 mg/ml、0.21876 mg/ml、0.56440 mg/ml。再取該貯備液 50 ml 置于 200 ml 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得對照品溶液。
2.2.2 供試品溶液制備
取本品細粉 1g，置于 25ml 量瓶中，加入適量甲醇，超聲處理 30min后放冷，再用甲醇定容至刻度，充分振搖，濾過，取續(xù)濾液，經 0.45μm 濾頭過濾，即得。
2.2.3 陰性樣品溶液制備
取缺當歸（含綠原酸、阿魏酸）、酒白芍（芍藥苷）、川芎（阿魏酸）、杜仲（松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷酸）、陳皮（橙皮苷）的剩余藥材，按照處方及工藝制備陰性樣品，再按照“2.2.2”項下方法制備陰性樣品溶液。
2.3一測多評法測定各成分含量
2.3.1 專屬性實驗
精密吸取上述陰性樣品溶液、對照品溶液及供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進樣，記錄色譜圖，見圖1。結果顯示，各成分有效分離且陰性對照無干擾，表明該方法專屬性良好。
圖1 高效液相色譜圖
2.3.2 線性關系考察
將對照品稀釋成 6 個不同濃度，分別取 5 μl，按“2.1”項下色譜條件進樣測定。以C質量濃度為橫坐標（X， mg/ml）、S 峰面積為縱坐標（Y），進行回歸分析，結果見表1。各成分在各自范圍內線性關系良好。
表1 各成分線性關系
2.3.3 精密度試驗
取對照品溶液 1 ml，按照“2.1”項下色譜條件重復進樣 6 次。計算六種成分的峰面積 RSD 分別為 0.29%、0.82%、0.50%、0.86%、1.08%、0.18%，表明儀器精密度良好。
2.3.4 重復性試驗
取批號為 20031 的樣品，按“2.2.2”項下方法制備 6 份，以“2.1”項色譜條件進樣測定，計算各成分含量 RSD分別為 0.62%、1.51%、0.82%、1.32%、1.40%、0.58%，表明該方法重復性良好。
2.3.5 穩(wěn)定性試驗
取同一樣品溶液，在 0、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h 時分別進樣，測定綠原酸、京尼平苷酸、芍藥苷、阿魏酸、橙皮苷、松脂醇二葡萄糖苷的峰面積 , 計算 RSD分別為 1.14%、0.90%、1.27%、0.79%、1.10%、0.84%，表明溶液在 12 h 內穩(wěn)定性良好。
2.3.6 加樣回收率試驗
取批號為 20031 的樣品，研細后取 6 份，每份約 0.5 g，置 25 ml 容量瓶中，加入對照品溶液 10 ml，加甲醇適量，超聲處理 30 min，冷卻后加甲醇至刻度，搖勻，濾過，按“2.1”項色譜條件進樣測定，計算回收率分別為97.77%、98.73%、99.26%、99.35%、98.27%、98.85%，RSD 分別為 1.21%、1.24%、0.88%、0.97%、1.04%、1.17%。
2.3.7 樣品含量測定
取 6 批樣品，按“2.2.2”項下方法制備，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，結果見表2。
表2 各成分含量測定結果（mg/g）
3.討 論
3.1檢測波長選擇
由于中藥方劑成分復雜，各成分的最大吸收波長不同，本實驗在190 nm ～ 400 nm 范圍內進行全波長掃描。結果顯示，芍藥苷、阿魏酸、綠原酸、橙皮苷、松脂醇二葡萄糖苷和京尼平苷酸分別在 230 nm、310 nm、327 nm、283 nm、277 nm 和 254 nm 處有最大吸收。但通過對比幾種成分的全波長掃描結果，發(fā)現(xiàn)它們在 230 nm 處的峰面積減少較小。因此，選擇在 230 nm 處記錄色譜圖，并進行 6 種成分的測定。
3.2流動相選擇
本實驗對比了乙腈 -0.1% 磷酸、甲醇 -0.1% 冰醋酸、甲醇 -0.1% 磷酸和甲醇 - 水作為流動相，不同成分的分離效果及峰形。結果顯示，甲醇 -0.1% 磷酸作為流動相時分離效果及峰形最佳。由于樣品成分復雜且各有效成分保留時間長短不一，經反復實驗確定采用梯度洗脫方式進樣，以實現(xiàn)各成分的有效分離。
3.3提取方法
參考《中國藥典》中樣品的處理方法，本實驗分別采用了加熱回流和超聲波處理兩種方法進行研究。研究發(fā) 現(xiàn)， 不 同 超 聲 提 取 時 間（30 min、45 min、60 min）提取率差異不明顯，30 min 時各成分已能有效提取；加熱回流（30 min、60 min）的提取效果與超聲提取的差異不大。為簡化操作，選擇超聲波提取作為樣品處理方法。此外，通過改變不同提取溶劑發(fā)現(xiàn)，甲醇作溶劑時橙皮苷提取率最高，而使用含水的有機溶劑作為提取溶劑時，橙皮苷的損失較為明顯。而其他幾種成分受提取溶劑變化影響較小。
4.結 論
本文對婦科養(yǎng)榮丸（濃縮丸）中的 4 種藥材 6 個指標成分進行了定量分析，為該藥品的整體質量控制提供了科學依據(jù)，使整體質量控制更加全面和合理，具有重要的參考價值。
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本文作者李磊1、張強1、景廷杰1、陳玉海1,2，1.仲景宛西制藥股份有限公司、2.河南省中藥固體制劑技術創(chuàng)新中心，李磊為本文第一作者，從事中藥生產質量控制與研發(fā)，擔任仲景宛西制藥股份有限公司提取車間主任，僅供交流學習。
來源：制藥工藝與裝備
