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嘉峪檢測網 2021-03-27 09:22
試驗.簡介
致敏試驗，已致敏的機體再次接觸相同抗原或半抗原時所發生的組織損傷或生理功能紊亂。
具有致敏作用的化學物經一定途徑進入機體，與組織蛋白結合形成完全抗原，刺激免疫活性細胞產生致敏淋巴細胞或體液抗體；經1~2周致敏期，使體內免疫反應得到充分發展，形成一定數量的致敏淋巴細胞或特異抗體。當再次接觸（激發）時使機體對該化學物產生感受性增高的狀態，以一定的異常形式表現
致敏試驗與刺激試驗的區別
刺激試驗是一個局部的炎癥反應，而致敏是全身免疫系統的反應，屬于細胞免疫應答
應用范圍舉例：
常用測試方法Common test methods
1、豚鼠最大劑量法（GPMT）
2、封閉式貼敷法（Buehler 試驗）
3、局部淋巴結試驗法（LLNA）
其中豚鼠最大劑量法（GPMT）和封閉式貼敷法（Buehler試驗）是最常用的、生物安全性評價中使用率最高的兩種方法。
豚鼠最大劑量試驗是最敏感的方法，歐洲國家使用此方法較廣泛；
封閉式貼敷試驗適用于局部產品，美國常用此方法。
局部淋巴結試驗（LLNA）被經濟與合作發展組織接受作為當前豚鼠試驗的唯一替代方法，該法對動物保護方面也有所改善，也被認可用于化學物致敏活性的檢測。
測試標準testing standard
常見測試標準：
1、醫療器械生物學評價 第10部分：刺激與遲發型超敏反應試驗 ISO 10993-10:2010
2、醫療器械生物學評價 第10部分:刺激與皮膚致敏試驗 GB/T 16886.10-2017
測試步驟
致敏試驗-豚鼠最大劑量法（GPMT）
試驗原理：單一化學物采用豚鼠最大劑量試驗，對材料在試驗條件下使豚鼠產生皮膚致敏反應的潛能做出評定。
1、準備動物
30只豚鼠，雌雄不限，300g~500g。
2、預試驗
預試驗目的：為了確定主試驗中所用試驗樣品的濃度。
確定主試驗中所用實驗樣品的濃度
為主試驗的局部誘導階段所選擇的最高濃度應僅導致輕度紅斑，不產生其他有害作用
為主試驗的激發階段選擇的最高濃度應不使動物產生紅斑
3、主試驗
3.1 動物分組
每種試驗樣品應至少使用10只動物，對照組至少使用5只動物。
10只試驗動物和5只對照動物如全部呈陰性反應，則再進行試驗也未必會出現陽性反應。
但是，如出現任何疑似反應時，應進行再激發，如仍有疑似反應，則要重新進行試驗，最少采用20只試驗動物和10只對照動物。
3.2 皮內誘導階段->局部誘導階段->激發階段
按下圖所示（A、B和C），在每只動物去毛的肩胛骨內側部位成對皮內注射0.1mL
說明：
1——頭端；
2——0.1mL皮內注射點；
3——去毛的肩胛骨內側部位；
4——尾端。
結果評價Evaluation of the results
動物觀察
除去敷貼片后24h和48h觀察試驗組和對照組動物激發部位皮膚情況，特別推薦在自然或全光譜光線下觀察皮膚反應。按Magnusson和Kligman分級標準對每一激發部位和每一觀察時間皮膚紅斑和水腫反應進行描述并分級。
結果評價
對照組動物評分小于1，試驗組評分≥1時，提示為致敏
對照組動物評分≥1，實驗組反應超過對照組中最嚴重的反應，認為致敏
如試驗組動物出現反應的動物數多于對照組動物，但反應強度并不超過對照組，可能需要在首次激發后1周~2周進行再次激發，以明確反應
來源：Internet
