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嘉峪檢測網 2024-10-17 08:31
摘 要： 建立氣相色譜法測定鹽酸氯丙嗪注射液中5種抗氧化劑。采用乙酸乙酯作為提取溶劑，HP-1701毛細管色譜柱分離，分流比為10∶1，用氫火焰離子化檢測器（FID）檢測，色譜峰面積外標法定量。5種抗氧化劑能實現完全分離，其質量分數在0～100 μg/mL范圍內與色譜峰面積有良好的線性關系，相關系數均大于0.999，檢出限為2.0~4.0 mg/kg，定量限為5.0~9.0 mg/kg。樣品加標回收率為89.36%～95.92%，測定結果的相對標準偏差均小于8%（n=6）。該方法可滿足鹽酸氯丙嗪注射液中5種抗氧化劑含量的檢測。
關鍵詞： 氣相色譜法； 鹽酸氯丙嗪注射液； 抗氧化劑
鹽酸氯丙嗪注射液是一種吩噻嗪類抗精神病藥，對興奮躁動、幻覺妄想、思維障礙及行為紊亂等陽性癥狀有較好的療效，用于治療精神分裂癥，躁狂癥或其他精神病性障礙，也可治療各種原因所致的嘔吐或頑固性呃逆[1?4]。
鹽酸氯丙嗪具有吩噻嗪母核，環中的S和N原子都是良好的電子給予體，易被氧化。鹽酸氯丙嗪注射液在日光作用下可引起氧化反應，使注射液pH降低[2?6]，因此鹽酸氯丙嗪注射液中常需加入一定量的抗氧化劑，用以阻止其氧化變質。然而，某些抗氧化劑的不當使用可能會影響藥效甚至誘發一些疾病。為規范抗氧化劑的科學使用，建立相應的檢測方法具有十分重要的意義[7]。
目前，對于食品、飼料等產品中抗氧化劑含量檢測文獻甚多[8?15]，但針對藥物制劑中多種抗氧化劑的檢測方法較為鮮見，已有藥品中的檢測方法局限于少數幾類抗氧化劑。筆者建立了氣相色譜（GC）法同時測定鹽酸氯丙嗪注射液中丁基羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲苯(BHT)、叔丁基對苯二酚(TBHQ)、植酸、硫代二丙酸甘油酯5種抗氧化劑，該方法大幅縮短分析時間，提高了檢測效率，為保障鹽酸氯丙嗪注射液的質量安全以及避免抗氧化劑在鹽酸氯丙嗪注射液中的濫用提供技術手段。
1、 實驗部分
1.1 主要儀器與試劑
氣相色譜儀：GC-2030型，配FID檢測器，日本島津公司。
純水/超純水一體化系統：Milli-Q Direct-Q8型，美國密理博公司。
電子分析天平：BSA224S型，感量為0.1 mg，德國賽多利斯公司。
丙酮、乙酸乙酯：均為色譜純，上海安譜實驗科技股份有限公司。
氯化鈉：分析純，中國醫藥集團有限公司。
丁基羥基茴香醚(BHA)標準物質：100 mg，質量分數為98%，標準物質編號為IR-20908，北京壇墨質檢標準物質中心。
二丁基羥基甲苯(BHT)溶液標準物質：1 000 μg/mL，溶劑為甲醇，標準物質編號為GBW (E)100651，北京壇墨質檢標準物質中心。
叔丁基對苯二酚(TBHQ) 溶液標準物質：1 000 μg/mL，溶劑為甲醇，標準物質編號為90984JC，北京壇墨質檢標準物質中心。
植酸標準物質：100 mg，質量分數為98%，標準物質編號為1ST2315，北京壇墨質檢標準物質中心。
硫代二丙酸甘油酯標準物質：100 mg，質量分數為99%,，標準物質編號為MFCD00002780，德國默克公司。
鹽酸氯丙嗪注射液樣品：武漢遠大制藥集團有限公司。
實驗用水為二級純水。
1.2 標準溶液的配制
1.2.1 混合標準儲備溶液
分別準確稱取BHA、植酸、硫代二丙酸甘油酯標準物質10.0 mg于10 mL容量瓶中，再分別準確移取BHT、TBHQ溶液標準物質1.0 mL于同一10 mL容量瓶中，以丙酮溶解并定容，渦旋混勻，得到各組分質量濃度為100 μg/mL的混合標準儲備溶液。
1.2.2 系列混合標準工作溶液
分別準確移取0、0.1、0.2、0.4、0.5、1.0 mL混合標準儲備溶液于1.0 mL容量瓶中，以丙酮稀釋并定容，得到各組分質量濃度均分別為0、10、20、40、50、100 μg/mL的系列混合標準工作溶液。
1.3 氣相色譜條件
色譜柱：HP-1701型毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm，美國安捷倫科技有限公司）；進樣口溫度：280 ℃；分流比：10∶1；升溫程序：初始溫度為50 ℃，保留1 min，然后以5 ℃/min速率升溫至150 ℃，再以10 ℃/min速率升溫至280 ℃，保持6 min；FID溫度：300 ℃。
1.4 實驗方法
準確稱取鹽酸氯丙嗪注射液樣品2 g，置于塑料離心管中，加入1 mL蒸餾水與1 g氯化鈉溶解后，再加入5.0 mL乙酸乙酯提取，以5 000 r/min轉速離心5 min，取上清液，將殘渣重復提取1次，合并上清液，氮吹至近干，加入1.0 mL丙酮溶解，過0.22 μm濾膜后，供氣相色譜分析。同時進行空白實驗，以外標法定量。
2、 結果與討論
2.1 提取溶劑的選擇
BHA、BHT、TBHQ、植酸、硫代二丙酸甘油酯5種抗氧化劑屬中等極性化合物，實驗室常見可供選擇的提取試劑有乙醚、乙酸乙酯、乙腈、二氯甲烷等。考察上述5種常見有機溶劑對鹽酸氯丙嗪注射液中5種抗氧化劑的提取效率見圖1。由圖1可知，在相同加標水平（10 mg/kg）下，采用乙酸乙酯作為提取溶劑，5種抗氧化劑的加標回收率均較為理想，水平均90%以上，其整體提取效率要優于其他4種有機試劑，因此選擇乙酸乙酯作為提取溶劑。
圖1 使用不同提取溶劑時5種抗氧化劑的回收率（n=3）
Fig. 1 Effect of different extraction solvents on the recovery rates of 5 antioxidants with spiking （n=3）
2.2 提取溶劑體積
提取溶劑體積的選擇需同時考慮取樣量與檢測靈敏度兩個因素。當提取溶劑體積較小時，組分的濃度就較高，檢測靈敏度自然也高；而當提取溶劑體積偏小時，樣品被提取不完全，回收率不能滿足試驗要求，影響檢測結果準確性。試驗考察提取溶劑體積分別為1、2、5、10 mL時，5種抗氧化劑的檢測靈敏度及回收率。結果表明，當提取溶劑體積分別為1、2 mL時，5種抗氧化劑的回收率均低于80%；當提取溶劑體積分別為5、10 mL時，5種抗氧化劑的回收率均高于90%。考慮到檢測靈敏度、經濟成本等因素，最終設定取樣質量為2 g，提取溶劑的體積為5 mL。
2.3 氯化鈉添加量
氯化鈉的加入能夠降低5種抗氧化劑在試樣中的溶解程度，從而更容易被提取出來。向空白試樣中加入一定量的5種抗氧化劑混合標準溶液，保持其他條件不變，考察5種抗氧化劑的回收率，結果見圖2。由圖2可知，隨著氯化鈉添加量的逐步增加，5種抗氧化劑的色譜峰面積均有所增大。當氯化鈉加入質量為1 g時，樣品溶液中氯化鈉已趨于飽和，5種抗氧化劑加標回收率達到最高，因此選擇氯化鈉添加量為1.0 g。
圖2 不同氯化鈉添加量對應的5種抗氧化劑回收率（n=3）
Fig. 2 Effect of sodium chloride addition on the recovery rates of 5 antioxidants with added standards （n=3）
2.4 色譜柱的篩選
采用HP-5毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）、HP-1701毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）、HP-INNOWAX毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）3種常見毛細管色譜柱進行試驗。結果表明，HP-1701毛細管色譜柱對5種抗氧化劑分離效果良好，HP-INNOWAX毛細管色譜柱分離效果最差，而HP-5毛細管色譜柱對于植酸、TBHQ兩個組分的分離效果較差。因柱箱升溫程序對各目標物的分離也有一定影響，經過多次試驗摸索發現，依據1.3色譜條件，5種抗氧化劑分離效果佳，各組分峰形良好，混合標準溶液色譜圖見圖3。
4—植酸；5—硫代二丙酸甘油酯圖3 5種抗氧化劑混合標準溶液氣相色譜圖
Fig. 3 Gas chromatograms of 5 mixed standard solutions of antioxidants
t/min ；1—BHA；2—BHT；3—TBHQ；
2.5 分流比的選擇
一般來說，分流比設置得越低，檢測的靈敏度越高。在氣相色譜圖上TBHQ與植酸出峰位置接近，互相間容易產生干擾，從而影響兩者的分離效果，造成二者檢測結果的不準確。通過反復試驗摸索，最終設置分流比為10∶1時效果較佳，不僅提高了檢測靈敏度，同時保證了目標物的分離度，提升檢測結果的準確度，因此設置分流比為10∶1。
2.6 線性關系、檢出限及定量限
取一定量的5種抗氧化劑系列混合標準工作溶液于進樣小瓶中，采用所建方法進行分析，分別以5種抗氧化劑標準溶液的質量濃度（x）為橫坐標,對應色譜峰面積（y）為縱坐標，繪制標準工作曲線。以3倍信噪比對應的標準溶液的濃度折算成樣品中的質量分數作為方法檢出限，以10倍信噪比對應的標準溶液的濃度折算成樣品中的質量分數作為定量限。5種抗氧化劑質量濃度線性范圍、線性方程、相關系數、檢出限及定量限見表1。由表1可知，5種抗氧化劑的質量濃度在0～100 mg/L范圍內與色譜峰面積具有良好的線性關系，相關系數均大于0.999。檢出限為2.0~4.0 mg/kg，定量限為5.0~9.0 mg/kg。
表1 5種抗氧化劑線性關系、檢出限及定量限
Tab. 1 Linear relationship, detection limit, and quantification limit of 5 antioxidants
2.7 樣品加標回收試驗
取未檢出5種抗氧化劑的空白鹽酸氯丙嗪注射液，以10、20、100 mg/kg水平分別加入混合標準溶液，按1.4步驟處理并平行測定6次，試驗結果見表2。由表2可知，5種抗氧化劑回收率為89.36%~95.92%，測定結果的相對標準偏差均小于8%，表明該方法準確度較高且精密度良好。
表2 樣品加標回收試驗結果（n=6）
Tab. 2 Precision and spiked recovery test results (n=6)
3、 結語
通過優化提取溶劑、氯化鈉添加量、色譜柱型號以及分流比等試驗參數，建立了氣相色譜法同時測定鹽酸氯丙嗪注射液中5種抗氧化劑含量。該方法具有靈敏、快速、重現性好等特點，可應用于鹽酸氯丙嗪注射液中抗氧化劑成分的快速定量檢測，為保障藥物制劑的質量安全提供技術手段。
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引用本文： 朱玉婷，李燦，武蕊，等 . 氣相色譜法測定鹽酸氯丙嗪注射液中5種抗氧化劑［J］. 化學分析計量，2024，33（8）：7. (ZHU Yuting, LI Can, WU Rui, et al. Determination of 5 antioxidants in chlorpromazine hydrochloride injection by gas chromatography[J]. Chemical Analysis and Meterage, 2024, 33(8): 7.)
來源：化學分析計量
