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嘉峪檢測網(wǎng) 2021-06-17 11:10
眾所周知，口服固體制劑的溶出方法開發(fā)是個爭論不休的大課題，如何以體外溶出行為評價體內行為，我們今天姑且不聊，主要聊一聊溶出度與溶出曲線方法學驗證的具體內容。而溶出的檢測方法常用的是紫外-可見分光光度法(UV法)和高效液相色譜法(HPLC法)兩種。
本文主要適用于口服固體制劑以HPLC法檢測溶出度和溶出曲線需要進行的方法學驗證試驗，UV法需要驗證的內容大同小異，可根據(jù)實際情況加以調整，大體原則不變，現(xiàn)將具體內容匯總如下：
1.色譜條件的確定
溶出度的檢測方法，首選以含量測定方法為原點進行優(yōu)化。若含量測定方法合適，則可與其方法一致，省去一部分開發(fā)內容。但當含量測定采集時間較長時，建議優(yōu)化方法，使溶出采集時間盡量短，否則一條溶出曲線的測定時間將非常漫長，在穩(wěn)定性過程中的檢測將更令人等到頭禿，勞民傷財?shù)氖聝涸郾M量不干。
值得關注的是，由于溶出曲線各種介質與含量測定所采用的溶劑不同，供試品溶液濃度也并不一致，故峰型柱效可能會有變化，故開發(fā)過程中應關注系統(tǒng)適用性要求。
另外有一種情況，主成分在某種溶出介質中很不穩(wěn)定，產生降解雜質，需要將降解雜質含量與溶出量加和計算，此時的測定方法應能將降解雜質峰與主成分峰完全分離，方不影響測定結果。
2.分析方法的驗證
按照慣例，先上一個匯總表概括說明驗證內容：
注：測定中各溶出介質均需進行方法學驗證（耐用性可酌情減少實驗，有時僅考察標準介質就具有一定的代表性了）。
下面，將方法學驗證中的各項試驗要求展開詳述。
2.1專屬性
目的：考察空白溶劑、空白輔料與待測主成分峰之間的分離情況。
空白溶劑、對照品溶液、供試品溶液：按擬定標準配制。
空白輔料溶液：空白輔料按處方比例混合后，按擬定標準配制（需考察膠囊殼等基質）。
需考慮圖譜中肉眼可見的較大降解雜質與主成分的分離情況，必要時加和計算溶出量。溶出度不要求考慮普通雜質與主成分的分離情況，也不要求進行強制降解試驗。
2.2溶液穩(wěn)定性
目的：考察對照品溶液和供試品溶液配制后的穩(wěn)定時間，為工藝驗證、批檢驗、穩(wěn)定性考察以及上市后的溶出度與溶出曲線測定提供依據(jù)。
系統(tǒng)適用性溶液視情況考察，對照品溶液與供試品溶液必須考察。
注意：溶液穩(wěn)定性的考察時間也應針對具體情況，如采集時間較長，考察時間也應延長，目的是使后續(xù)檢驗更方便。當溶液不穩(wěn)定時，重復考察避光條件或冷藏條件下是否穩(wěn)定，視情況而選擇規(guī)定溶液穩(wěn)定性的考察時間。
2.3定量限
目的：為確保分析方法測定供試品含量的靈敏度。
定量限的概念：是指樣品中被測物能被定量測定的最低量，其測定結果應具有一定的準確度。定量限體現(xiàn)了分析方法是否具備靈敏的定量檢測能力。
將對照品溶液逐級稀釋，當稀釋至信噪比約為10時，此時濃度可作為定量限濃度。
溶出方法學并不強制要求做檢測限。
注意：定量限結果受色譜系統(tǒng)影響較大，如色譜柱、流動相、色譜儀的狀態(tài)，甚至次日試驗的結果會與前一天不同，在這種情況下，若定量限濃度較低，應換用色譜系統(tǒng)再次測定，以確保方法的靈敏度。
2.4線性與范圍
目的：在規(guī)定的濃度范圍內，測定響應值（峰面積）與待測組分濃度呈比例關系的程度。
敲黑板——峰面積與濃度呈線性關系，是外標法的前提。
配制一份對照品母液，從中稀釋配制成一系列不同濃度的線性溶液，至少制備5份（建議濃度點的總數(shù)為奇數(shù)），以測得的響應信號對待測物的濃度作圖，檢查是否呈良好的線性關系。
溶出度的線性溶液濃度要求：推薦為20%~150%。對于緩釋制劑的溶出度，推薦為0~150%。注意線性溶液的最低濃度應大于定量限濃度，并應涵蓋溶出曲線測定的最低濃度點。線性的濃度點盡量均勻分布。
2.5儀器精密度
目的：為保證儀器每次所測對照品溶液峰面積均一致，以確保結果的準確性，設計儀器精密度試驗。
取對照品溶液，連續(xù)進樣6次。考察保留時間和峰面積的RSD%。
2.6回收率
目的：考察采用擬定方法測定結果與真實值或參考值接近的程度，也叫做回收率試驗。用至少測定6份結果進行評價，或設計3種不同濃度，每個濃度平行配制3份。
按照擬定質量標準配制空白溶劑、對照品溶液。
回收率供試品溶液：按處方比例混合的空白輔料+主成分對照品，再按照擬定質量標準配制溶液。
不同于含量測定，溶出曲線過程中會涉及到較低濃度點，故回收率推薦設計較低濃度，保證在溶出行為測定的整個過程中，該方法都是較為準確的。回收率驗證的范圍必須囊括100%濃度水平。濃度范圍一般要求為限度的±20%，高濃度點可適當調整至110%。
回收率結果報告表格推薦內容如下：
2.7耐用性
針對耐用性，若涉及到的各溶出介質都去做一遍，工作量就過于龐大了。故推薦至少考察標準介質中的耐用性即可，其他介質視情況考察。
（1）溶出方法的耐用性
目的：考察溶出條件發(fā)生微小變化時，各時間點溶出量的變化情況。
還是列表說明推薦的變動條件：
根據(jù)品種特點考察耐用性，推薦但不僅限于上述變動條件。還有很多需要注意的方面，比如表面活性劑的濃度和不同廠家、不同緩沖液濃度、配制介質的水的脫氣條件等，都是需要研究者在試驗過程中予以關注的細節(jié)。
（2）測定方法的耐用性
這一個模塊的內容與含量測定耐用性要求基本一致。
目的：考察色譜條件發(fā)生微小變化時對測定結果的影響。
按照擬定標準配制空白溶劑、對照品溶液和供試品溶液（系統(tǒng)適用性溶液視情況配制），計算不同條件下供試品的含量測定結果，關注系統(tǒng)適用性是否符合標準要求（有時方法中并不擬定配制系統(tǒng)適用性溶液，而是規(guī)定主峰理論板數(shù)和拖尾因子等，也要相應關注和統(tǒng)計）
同樣放一張表格，將耐用性試驗內容和結果要求直觀呈現(xiàn)如下：
耐用性考察的內容可能還有很多，請各位根據(jù)實際情況增減。另外，有時幾個條件同時變化的情況下是否耐用，也是需要考察的。但考察疊加條件工作量較大，可自行選擇較為重要的條件進行考察。耐用性試驗時，觀察峰型和結果的變化趨勢，后續(xù)檢驗一旦出現(xiàn)問題，可以通過現(xiàn)象推測偏差原因，及時解決問題。
注意：變化不同色譜條件時，切記根據(jù)需要延長采集時間。
當變動條件后測定結果與正常條件基本一致，且系統(tǒng)適用性指標符合標準規(guī)定，即可下測定方法耐用的結論。
2.8批內均一性和批間均一性
這兩項指標既是檢驗企業(yè)產品的標桿，同時也是檢驗溶出方法是否精密的標桿。
批內均一性：取同一批次產品的12個劑量單位（有時6個劑量單位也能夠滿足考察要求，比如快速溶出等情況），測定溶出曲線，計算各取樣時間點的RSD值。其中，早期的一些取樣時間點（如5min），要求RSD≤20%；其他時間點，要求RSD≤10%。
批間均一性：取不同批次產品的12個劑量單位（有時6個劑量單位也能夠滿足考察要求，比如快速溶出等情況），測定溶出曲線，比較各批次的溶出曲線是否相似。
3.注意事項
3.1質量標準寫法
中國藥典2015年版二部中所載各品種，即便是緩釋制劑，對這一項檢查也不再寫成“釋放度”而是寫成“溶出度”，因此在撰寫藥典版質量標準時，推薦按照藥典規(guī)范寫法。
3.2方法學驗證的范圍
驗證范圍包括但不僅包括該品種的各常規(guī)介質。
若該制劑涉及到劑量傾瀉的考察，應進行加入一定量乙醇介質中的溶出方法學驗證。
若需考察該產品在生物介質中的溶出行為，則應進行生物介質中的溶出方法學驗證。
總之，有的放矢，有據(jù)可依，檢測做了什么，方法就需驗證什么。
3.3配制過程中的溶劑問題
當主成分在相應溶出介質中難溶時，在方法學驗證中可使用少量有機溶劑先使其溶解（線性、回收率等試驗），再用相應溶出介質稀釋定容，但最終進樣分析的供試品溶液中，有機溶劑的比例應不超過總體積的5%。
來源：銘研醫(yī)藥
