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我們的分析對象往往不是中性物質，這就意味著流動相的pH會對我們的分離情況具有一定的影響。下面就讓我們一起來了解一下pH究竟如何影響我們的分離情況吧。

1. pH對分析物的離子化狀態的影響

分析物在不同的 pH 條件下會處于不同的離子化狀態。對于酸性化合物，pH 較低時會以非離子化形式存在，而在較高 pH 下則會解離成陰離子。對于堿性化合物，較高 pH 時會以非離子化形式存在，而在較低 pH 下會解離成陽離子。

非離子化形式的化合物通常更容易被疏水性的反相柱（如C18柱）保留，保留時間較長。

離子化形式的化合物則通常較難被反相柱保留，保留時間較短。

具體表現為：

對于酸性化合物，當流動相的 pH 低于其 pKa 時，它通常是非離子化的，保留時間較長；當 pH 高于其 pKa 時，它是離子化的，保留時間較短。

對于堿性化合物，情況相反，當 pH 高于其 pKa 時，保留時間較長；低于其 pKa 時，保留時間較短。

2. 選擇性

改變流動相的 pH 可以調節多種化合物的離子化狀態，從而改變它們之間的相對保留行為。這對多組分混合物分離時的選擇性影響尤為重要。例如：

通過調整 pH，可能會讓一種化合物保持非離子狀態，另一個化合物則保持離子狀態，從而增強它們的分離效果。

在某些 pH 下，不同化合物的離子化行為差異顯著，有助于優化分離。

3. 峰形

不適當的 pH 可能導致峰形變差，尤其是當 pH 靠近化合物的 pKa 值時，部分化合物處于離子化和非離子化形式的混合狀態，導致峰形拖尾或展寬。通過選擇合適的 pH，可以改善峰形，使得分離效果更好。

4. 流動相和柱的穩定性

pH 對流動相和色譜柱的穩定性也有影響。大多數反相色譜柱（如C18柱）在極端 pH 條件下（非常酸性或非常堿性）會發生降解，因此通常需要在 pH 2到8 的范圍內操作。此外，pH 修飾劑如甲酸或醋酸等通常在較中性或略酸性條件下使用，保持質譜等檢測設備的兼容性。