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DNA凝膠回收即從瓊脂糖凝膠中提取DNA的過程，大致經過切膠、溶解、離心分離等步驟，常規回收過程一般使用試劑盒實現，其常見問題及注意事項如下：

1.對于需要回收的DNA，跑膠時應選擇梳齒寬、薄的梳子，同時保證上樣量充足。

2.切膠過程中，若不確定條帶具體位置，可在紫外照射下進行，快速切膠，防止紫外照射時間過久導致DNA變性。同時，切膠的刀片保持干凈，防止污染，切膠時盡量只切有條帶的膠，減小切膠體積，但務必保證將條帶膠全部切下，將切下的膠塊切小后全部收集到離心管內。

3.加入溶解液溶膠時，在55℃-65℃的水浴（具體溫度由說明書決定）中進行，同時2-3min震蕩混勻一次，保證瓊脂糖凝膠充分溶解，否則易導致回收效率過低，正常全部溶解后溶液呈淡黃色。

4.過柱過程中保持柱子和回收管干凈，每一步充分離心，同時保證每一步加入正確的試劑。

5.洗脫液提前在55℃-65℃水浴中溫浴。

6.加入洗脫液前，將柱子開蓋，室溫晾5-10min左右，最大程度上將酒精揮發干凈，酒精污染也是后續影響A260/A230比值的重要因素。

7.加入洗脫液體積不宜太多，以30-50μl為宜，洗脫液太多會造成回收濃度過低，洗脫液量太少則不宜洗脫，加入洗脫液時快速垂直滴到膜中央。加入后需靜置一定長的時間，充分洗脫。同時，洗脫液最后也可用實驗用的超純水，但需保證PH值在7.0-8.5之間。

8.測濃度時，重點關注A260/A280的比值，以1.8-2為宜。若回收成功無污染，A260/A230比值一般在1.8以上。

9.凝膠回收試劑盒中，部分試劑需加入無水乙醇后再使用，同時注意試劑需在有效期內。

在實際膠回收的過程中，按說明書常規操作也會出現回收效率低、回收產物污染等情況，以我做實驗為例，在回收過程中均按說明書操作，測濃度時比值較低，如下圖所示：

在經過重復實驗比值仍未提高的基礎上，我們繼續往下做了后續的實驗，對后續的實驗影響不太明顯。同時，為提高A260/A230的比值，我們在回收結束后繼續做了純化，也由試劑盒完成，純化后DNA濃度會比純化前更低，但比值正常，因此在實際DNA凝膠回收的過程中，可根據回收前的DNA濃度選擇是否進行二次純化。